靈敏度

通過比較10個B0孔平均光密度值(OD)和10個5號管標準品的平均光密度值，計算出靈敏度。cAMP濃度的檢測極限通過標準曲線上0位置的兩個標準偏差來測定。

OD(B0平均數(shù)) =0.685± 0.003

OD（5號 標準品平均數(shù)）=0.604± 0.010

光密度偏差(0-0.4 pmol/mL) =0.081

2 SD"s of the Zero Standard =0.006

靈敏度 =081.0006.0/0.8×0.4 pmol/mL =29.6 fmol/mL

武漢紐斯特生物科技有限公司（WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd），系美國生命科學試劑供應商美國NewEastBio在中國的子公司。公司位于武漢東湖高新技術(shù)開發(fā)區(qū)光谷生物城.美國NewEastBio專注于生命科學和生物技術(shù)領(lǐng)域，主要產(chǎn)品有小分子、ELISA試劑盒、蛋白等，與世界高校和研究所、世界大制藥公司、生物科技公司和醫(yī)院等客戶建立了長期穩(wěn)定的合作關(guān)系，產(chǎn)品銷往世界。




試劑準備

   非乙?；痗GMP標準品將5000 pmol/mL cGMP標準品溶液平衡至室溫。從#1至#7標記六只潔凈試管。移取475μL 0.1M HCl到#1號試管，400μL到#2至#7號試管。加入25μL 5000 pmol/mL cGMP標準品到#1管中，劇烈渦旋震蕩。從#1管中取出100μL溶液至#2管中，渦旋震蕩。以此類推，重復上步操作，梯度稀釋至#7管。

   經(jīng)以上操作，人環(huán)磷酸腺苷 cAMP ELISA，#1至#6管中cGMP標準品濃度分別為250，50，10，2，0.4，0.08和0.016 pmol/mL（詳見cGMP加樣表）。稀釋過的標準品需在30分鐘內(nèi)使用。

   標記一只試管作為無標準品空白對照（NSB）。移取600μL 0.1M HCl到NSB管中。

    洗滌液將15 mL 10×洗滌液儲液加到135 mL去離子水中，稀釋成工作液。稀釋液可在室溫保存至試劑盒有效期限，或者3個月。

實驗步驟

使用前將各種試劑取出放置30分鐘，平衡至室溫。所有標準品和樣品必需設(shè)置平行對照實驗。

快速加入試劑至樣品中，立即漩渦震蕩2秒混勻。

1. 依據(jù)實驗鍵盤紙決定酶標條的使用量，將剩余的酶標條連同干燥劑一起放回密封塑料袋，密封，4℃保存。

2. 移取50μL中和液至各個微孔中，除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。

3. 移取100μL 0.1M HCl至NSB(非特異結(jié)合)孔和B0孔(0 pmol/mL cAMP標準品)。

4. 移取100μL cAMP標準品至相應的孔。

5. 移取100μL樣品至相應的孔。

6. 移取50μL 0.1M HCl至NSB(非特異結(jié)合)孔。7. 移取50μL 偶聯(lián)酶至各孔中，除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。

8. 移取50μL 抗l體工作液至各孔中，除了TA(全活性)孔、Blank(空白)孔和NSB(非特異結(jié)合)孔。

9. 將酶標孔置于孔板振動器上，250~500rpm，室溫孵育2小時。

10. 在吸水紙上拍干微孔內(nèi)溶液，加洗滌液400μL每孔洗3次，每次需拍干。

11. 后一次洗滌，清空各微孔，在干凈的無塵吸水紙上輕巧酶標板數(shù)次，以確保沒有洗滌液殘留。

12. 加5μL 偶聯(lián)酶至TA(全活性)孔。

13. 每孔200μL顯色底物溶液，于室溫靜置5~30分鐘。（顯色底物A和B需在臨用前15分鐘內(nèi)等體積混合，并避光放置。）

14. 每孔加入50μL終止液。終止后立即讀數(shù)。

15. 清除酶標l儀Blank(空白)孔值，讀取450nm處的光密度值，在570nm至590nm之間有修正。如果酶標l儀不能自動清除Blank(空白)孔值，那么手動扣除每個讀數(shù)的Blank(空白)孔光密度值。

人環(huán)磷酸腺苷 cAMP ELISA-武漢紐斯特生物(圖)由武漢紐斯特生物技術(shù)有限公司提供。武漢紐斯特生物技術(shù)有限公司為客戶提供“G蛋白活性,cAMP和cGMP ELISA試劑盒,蛋白點突變”等業(yè)務，公司擁有“紐斯特”等品牌，專注于生物化工等行業(yè)。，在湖北省武漢市東湖新技術(shù)開發(fā)區(qū)高新大道666號光谷生物城B3-3棟3樓的名聲不錯。歡迎來電垂詢，聯(lián)系人：黃經(jīng)理。