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不管是哪一種ELISA,它的操作都由以下幾種基本的操作組合而成:①將抗原或抗體吸附到固相載體上;②加入待檢樣品以及后續(xù)試劑;③溫育;④洗滌去掉游離未結(jié)合的反應(yīng)物;⑤加入酶檢測底物;⑥結(jié)果的判讀。
ELISA操作步驟復(fù)雜,影響反應(yīng)因素較多。
測定小分子量物質(zhì)常用競爭法,其標(biāo)準(zhǔn)曲線中吸光度與受檢物質(zhì)的濃度呈負相關(guān)。
ELISA操作步驟復(fù)雜,影響反應(yīng)因素較多。
測定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA,標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬,曲線ZUI高點的吸光度可接近2.0,繪制時常用半對數(shù)值,以檢測物的濃度為橫坐標(biāo),以吸光度為縱坐標(biāo),將各濃度的值逐點連接,所得曲線一般呈S形,其頭、尾部曲線趨于平坦,中央較呈直線的部分是ZUI理想的檢測區(qū)域。
近年來,隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測定試劑幾成為現(xiàn)實的新一代試劑,CAMP/CGMP 代檢測,各種新型使用的測定方法也不斷出現(xiàn)。
ELISA檢測試劑盒應(yīng)用定性夾心免疫檢測技術(shù),用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,這些多肽是中國型HEV毒株nucleus 氨基酸序列中抗原性很強的肽段,分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。
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