4、本發(fā)明植物**培養(yǎng)基，其不含碘化鉀，在絕大多數(shù)植物中，碘元素不是必需元素，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)去除碘化鉀對(duì)植物**培養(yǎng)沒有影響，并且植物在脫離培養(yǎng)基進(jìn)行后期培養(yǎng)時(shí)仍可以從土壤等基質(zhì)中富集碘元素，去掉碘化鉀成分，也簡(jiǎn)化了培養(yǎng)基配制過程。5、本發(fā)明植物**培養(yǎng)基，其用nafeedta取代na2·edta和feso4·7h2o，該替換減少的**根離子通過適當(dāng)增加**銨成分來補(bǔ)充，該替換主要基于兩個(gè)特征，一方面，nafeedta是可溶性螯合鐵，更容易被植物吸收，有利于植物葉綠體發(fā)育，另一方面，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，na2·edta和feso4·7h2o水溶液ph偏酸是ms、b5和n6等眾多植物**培養(yǎng)基原始ph偏低及ph波動(dòng)大的主要原因，本發(fā)明培養(yǎng)基中使用nafeedta之后，經(jīng)ph為，而植物**適宜生長(zhǎng)的ph一般為，因此，使用nafeedta既促進(jìn)了植物對(duì)鐵離子的吸收，又有利于培養(yǎng)基ph的穩(wěn)定。6、本發(fā)明植物**培養(yǎng)基，其配方降低了mnso4·h2o、znso4·7h2o、h3bo3、cocl2·6h2o、na2moo4·2h2o的用量，增加了cuso4·5h2o、煙酸、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇的用量，該改變特征在于，有效減少愈傷**玻璃化發(fā)生，減少酚類物質(zhì)產(chǎn)生，提高愈傷**的出愈率，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，優(yōu)化后的培養(yǎng)基出愈時(shí)間提前，對(duì)多種植物的愈傷**誘導(dǎo)是有益的。無血清培養(yǎng)基提供了純凈的細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境。吉林基礎(chǔ)培養(yǎng)基進(jìn)口

    導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)基變質(zhì)失效?？刂萍?xì)胞培養(yǎng)基中**和霉菌，是延長(zhǎng)細(xì)胞培養(yǎng)基有效期的方法之一。清大天一在參考《中華******典》2005版二部附錄第100頁的口服給*制劑的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)，并嚴(yán)于該標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品的**數(shù)每1g不得超過200個(gè)，霉菌數(shù)每1g不得超過50個(gè)。稱取樣品1g，加入無菌純化水10mL溶解，混勻即得試樣。按中華******典2005年版二部附錄ⅪJ微生物限度檢查法進(jìn)行，檢查項(xiàng)目為**數(shù)、霉菌數(shù)。檢查法采用平皿法。細(xì)胞生長(zhǎng)試驗(yàn)這是一個(gè)性能特性表述的要求。細(xì)胞培養(yǎng)基的功能就是培養(yǎng)哺乳類動(dòng)物細(xì)胞，因此經(jīng)過細(xì)胞培養(yǎng)效果的檢驗(yàn)是產(chǎn)品***劣的直觀表述，這也是很多生物制*用戶要求的一項(xiàng)指標(biāo)。目前國(guó)內(nèi)尚無細(xì)胞培養(yǎng)和計(jì)數(shù)的法定方法，可參考《體外培養(yǎng)的原理與技術(shù)》中細(xì)胞計(jì)數(shù)法論述的內(nèi)容給出。按產(chǎn)品說明書配制培養(yǎng)液進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，前四天用含10％小牛血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)，觀察細(xì)胞形態(tài)并計(jì)數(shù)，檢查細(xì)胞培養(yǎng)基是否有促生長(zhǎng)的能力。后三天用不含小牛血清的培養(yǎng)液維持培養(yǎng)，觀察細(xì)胞形態(tài)并計(jì)數(shù)，檢查細(xì)胞培養(yǎng)基中是否有不利細(xì)胞生長(zhǎng)的***。本試驗(yàn)用細(xì)胞為VERO細(xì)胞。四、細(xì)胞培養(yǎng)基的使用方法細(xì)胞培養(yǎng)基的種類繁多，細(xì)胞培養(yǎng)方式也較多。西藏基礎(chǔ)培養(yǎng)基代理商MEM培養(yǎng)基適合多種類型的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。

    cs液體培養(yǎng)基和1/2cs液體培養(yǎng)基在用不同ph超純水(ph為)配制時(shí)的ph都較為穩(wěn)定，在未調(diào)ph的情況下，可直接用于多種植物培養(yǎng)。如圖8所示。(2)以克新18號(hào)馬鈴薯無菌苗為例，觀察在未調(diào)ph和將ph調(diào)至：a、培養(yǎng)基制作方法：隨機(jī)選取超純水，測(cè)得其ph為，用于配制8種不同的液體培養(yǎng)基。第一種：1/2ms未調(diào)ph液體培養(yǎng)基，其為取1/2ms基本培養(yǎng)基置于ph為；第二種：1/2cs未調(diào)ph液體培養(yǎng)基，其為取1/2cs基本培養(yǎng)基置于ph為；第三種：ms未調(diào)ph液體培養(yǎng)基，其為取ms基本培養(yǎng)基置于ph為；第四種：cs未調(diào)ph液體培養(yǎng)基，其為取cs基本培養(yǎng)基置于ph為；第五種：1/，其為取1/2ms基本培養(yǎng)基置于ph為，調(diào)ph至；第六種：1/，其為取1/2cs基本培養(yǎng)基置于ph為，調(diào)ph至；第七種：，其為取ms基本培養(yǎng)基置于ph為，調(diào)ph至；第八種：，其為取cs基本培養(yǎng)基置于ph為，調(diào)ph至。b、培養(yǎng)方法：從培養(yǎng)實(shí)例4所述培養(yǎng)基獲得長(zhǎng)勢(shì)**的馬鈴薯幼苗，在清水中緩苗2-3d后選取長(zhǎng)勢(shì)一致的馬鈴薯幼苗，如圖9-a所示，置于上述8種不同液體培養(yǎng)基8d，每隔2d更新1次液體培養(yǎng)基；于溫度22-23℃、濕度50-70％、光照強(qiáng)度2000-3000lux、光照和黑暗交替(光照時(shí)間14h、黑暗時(shí)間10h)條件下培養(yǎng)。

    一般情況下應(yīng)調(diào)pH比所需值低～，因過濾**后，pH值會(huì)升高約。8）在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，建議不加或加少量的***，如血清的濃度較低則所加***的量也要相應(yīng)降低一些。9）建議用1NHCl或1NNaOH來調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH，因?yàn)橛锰妓釟溻c來調(diào)對(duì)培養(yǎng)液的滲透壓影響比較大。如下圖所示：圖6-1MEM培養(yǎng)基（SLM，MD611）在pH值相同情況下所加的碳酸氫鈉、氫氧化鈉的量及所對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)液滲透壓圖6-2199培養(yǎng)基（MD502）在pH值相同情況下所加的碳酸氫鈉、氫氧化鈉的量及所對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)液滲透壓培養(yǎng)基**培養(yǎng)基的**方法主要有兩種，高壓**及um微孔濾膜過濾**。與過濾相比，高壓**的工作強(qiáng)度小，相對(duì)便宜，失敗率低，但易造成營(yíng)養(yǎng)成分的流失。高壓**某些培養(yǎng)基（如MEM）可進(jìn)行高壓**，例如清大天一的MEM培養(yǎng)基中的MD605、MD609等。其中不含有L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉，可在高壓**后加入。另外可高壓的谷氨酸鹽（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）可代替L-谷氨酰胺。為保證高壓**的效果，**設(shè)備的驗(yàn)證很關(guān)鍵，可高壓**的培養(yǎng)基在121℃、15psi，15分鐘的條件下完全可達(dá)到**效果及營(yíng)養(yǎng)成分的**小損失，因此不需將**時(shí)間延長(zhǎng)。過濾**大多數(shù)培養(yǎng)基采用～μm孔徑的微孔濾膜進(jìn)行過濾**，并且已成為培養(yǎng)基**的發(fā)展方向。MEM培養(yǎng)基提供了豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，支持細(xì)胞的快速增殖。

    生產(chǎn)上一般采用冷水噴淋冷卻，冷卻到40-50℃后，輸送到預(yù)先已經(jīng)**過的罐內(nèi)。（四）、間歇**與連續(xù)**的比較1、歇**的***和缺點(diǎn)***是設(shè)備要求低，不需另外設(shè)置加熱、冷卻裝置；操作要求低，適于手動(dòng)操作，適合于小批量生產(chǎn)規(guī)模；適合于含有大量固體物質(zhì)的培養(yǎng)基的**。缺點(diǎn)是培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)損失較多，**后培養(yǎng)基的質(zhì)量下降；需進(jìn)行反復(fù)的加熱和冷卻，能耗較高；不適合于大規(guī)模生產(chǎn)過程的**；發(fā)酵罐的利用率較低。2、連續(xù)**的***和缺點(diǎn)***是**溫度高，可減少培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的損失；操作條件恒定，**質(zhì)量穩(wěn)定；易于實(shí)現(xiàn)管道化和自控操作；避免了復(fù)的加熱和冷卻，提高了熱的利用率；發(fā)酵設(shè)備利用率高。缺點(diǎn)是對(duì)設(shè)備的要求高，需另外設(shè)置加熱、冷卻裝置；操作較麻煩；染菌的機(jī)會(huì)較多；不適合于含大量固體物料的**；對(duì)蒸汽的要求高。由此可見，無論在理論上或者在實(shí)踐上，與間歇**過程相比，連續(xù)**的***十分明顯。因此，連續(xù)**越來越多地被用培養(yǎng)基的**。無血清培養(yǎng)基為細(xì)胞培養(yǎng)提供了純凈的背景。寧夏RPMI1640培養(yǎng)基

使用減血清培養(yǎng)基能減少實(shí)驗(yàn)的誤差和干擾。吉林基礎(chǔ)培養(yǎng)基進(jìn)口

    所描述的實(shí)施例**是本申請(qǐng)一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒旧暾?qǐng)中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都應(yīng)當(dāng)屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。實(shí)施例1一種優(yōu)化的谷氨酸發(fā)酵培養(yǎng)基，其包括發(fā)酵培養(yǎng)基a和發(fā)酵培養(yǎng)基b；所述發(fā)酵培養(yǎng)基a首先添加，然后間隔24h添加發(fā)酵培養(yǎng)基b。所述發(fā)酵培養(yǎng)基a的制備方法為：取各原料：葡萄糖80g/l，酵母浸膏20g/l，k2hpo42g/l，mgso4·7h2o50mg/l，2-羥基乙胺40mg/l，cecl310mg/l，mnso4·h2o3mg/l，feso4·7h2o3mg/l，vb110mg/l，生物素7μg/l；將各原料攪拌均勻后，調(diào)節(jié)ph為，121℃**15min，自然冷卻，制得發(fā)酵培養(yǎng)基a；所述發(fā)酵培養(yǎng)基b的制備方法為：取各原料：琥珀酸5g/l，尿素2g/l，殼聚糖80mg/l；將各原料攪拌均勻后，調(diào)節(jié)ph為，121℃**15min，自然冷卻，制得發(fā)酵培養(yǎng)基b；采用常規(guī)發(fā)酵工藝：將黃色短桿菌gdk-9按8％接種量將種子液（od600nm為）接入裝有60l發(fā)酵培養(yǎng)基a的100l發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)24h，然后添加10l發(fā)酵培養(yǎng)基b，繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)24h，收集發(fā)酵液；整個(gè)發(fā)酵培養(yǎng)過程中，控制發(fā)酵溫度35℃，通風(fēng)比1∶，攪拌轉(zhuǎn)速300r/min，溶氧維持在20％。吉林基礎(chǔ)培養(yǎng)基進(jìn)口