第三節(jié)培養(yǎng)基的高壓**及效果驗(yàn)證消毒**在醫(yī)學(xué)實(shí)踐上有著重要意義。它可切斷傳播途徑、控制***擴(kuò)散造成的危害；也可殺滅物品或器皿上的**，防止醫(yī)院***；在醫(yī)學(xué)微生物檢驗(yàn)的領(lǐng)域中，消毒**是保正***的病原學(xué)檢驗(yàn)不受外來(lái)微生物污染的前提。（一）術(shù)語(yǔ)消毒(disinfection)、火菌(sterilization)、抑菌(bacteriostasis)、防腐（antisepsis）和無(wú)菌(asepsis)是常用術(shù)語(yǔ)。下面就術(shù)語(yǔ)概念加以敘述。(1)**。是用適當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)手段將物品中活的微生物殺滅或除去的方法。本法適用于制劑、原料、輔料及醫(yī)療器械等物品的**。（如外科器械、注射器、基礎(chǔ)培養(yǎng)基**等。）(2)消毒。是破壞物體上活的病原微生物的方法，但不包括**芽胞和非病原微生物。如用酒精溶液浸泡體溫計(jì)、新潔爾滅液擦拭檢查臺(tái)等。用于消毒的化學(xué)物品稱消毒劑(dis-infectant)。一般而言，消毒對(duì)象是指物體而不是機(jī)體。(3)防腐。直接使用防腐劑(antiseptics)破壞或**活的病原微牛物的方法。如外科手術(shù)前碘液擦洗皮膚、雙氧水清創(chuàng)傷口或**肥皂清冼雙手等。(4)無(wú)菌。防止***病原體進(jìn)入****或物品的操作技術(shù)稱無(wú)菌操作。無(wú)菌即為不存在活的微生物。用于消毒**的物理方法有熱力、電離輻射、超聲波、過(guò)濾等。無(wú)血清培養(yǎng)基適合于無(wú)血清環(huán)境的細(xì)胞培養(yǎng)。遼寧RPMI1640培養(yǎng)基哪家便宜

    發(fā)酵培養(yǎng)基為：葡萄糖80g/l，酵母浸膏20g/l，k2hpo42g/l，mgso4·7h2o50mg/l，cecl30-40mg/l，mnso4·h2o3mg/l，feso4·7h2o3mg/l，vb110mg/l，生物素7μg/l；發(fā)酵工藝同實(shí)施例1，100l發(fā)酵罐中含有70l發(fā)酵培養(yǎng)基。設(shè)置cecl3的添加濃度為0，，如圖1-2所示，隨著cecl3添加量的增加，菌體濃度和谷氨酸含量均有所提升，當(dāng)添加量為10mg/l時(shí)，菌體濃度和谷氨酸含量達(dá)到峰值，然后出現(xiàn)下降趨勢(shì)，但是整個(gè)過(guò)程中，糖酸轉(zhuǎn)化率沒(méi)有明顯改變（附圖未顯示）；說(shuō)明cecl3稀土鹽能夠促進(jìn)菌株增殖，提高谷氨酸相關(guān)合成酶的活力，提高谷氨酸的產(chǎn)量，但是過(guò)高的濃度會(huì)造成菌株增殖放緩和死亡，谷氨酸產(chǎn)量相應(yīng)下降。二、通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)確定cecl3添加量為10mg/l，在此基礎(chǔ)上，研究2-羥基乙胺對(duì)菌體濃度、谷氨酸含量以及糖酸轉(zhuǎn)化率的影響。設(shè)置2-羥基乙胺的濃度為，5,10,20,40,80,160mg/l，如圖3-4所示，隨著2-羥基乙胺添加量的增加，菌體濃度隨之增加，相應(yīng)地，谷氨酸含量和糖酸轉(zhuǎn)化率也有所提升，當(dāng)添加量為40mg/l時(shí)，菌體濃度和谷氨酸含量達(dá)到峰值，繼續(xù)增加2-羥基乙胺的濃度，產(chǎn)生明顯的抑菌效果，菌株密度下降明顯；原因是，低濃度的2-羥基乙胺可能促進(jìn)磷脂酰乙醇胺細(xì)胞壁組分的合成。遼寧RPMI1640培養(yǎng)基哪家便宜無(wú)酚紅培養(yǎng)基在實(shí)驗(yàn)中減少了潛在毒性。

    流加質(zhì)量百分比濃度為20％的葡萄糖維持殘?zhí)遣坏陀冢?，流加消泡劑消泡。?shí)施例2一種優(yōu)化的谷氨酸發(fā)酵培養(yǎng)基，其包括發(fā)酵培養(yǎng)基a和發(fā)酵培養(yǎng)基b；所述發(fā)酵培養(yǎng)基a首先添加，然后間隔24h添加發(fā)酵培養(yǎng)基b。所述發(fā)酵培養(yǎng)基a的制備方法為：取各原料：葡萄糖100g/l，酵母浸膏25g/l，k2hpo41g/l，mgso4·7h2o70mg/l，2-羥基乙胺20mg/l，cecl35mg/l，mnso4·h2o2mg/l，feso4·7h2o2mg/l，vb15mg/l，生物素5μg/l；將各原料攪拌均勻后，調(diào)節(jié)ph為，121℃**15min，自然冷卻，制得發(fā)酵培養(yǎng)基a；所述發(fā)酵培養(yǎng)基b的制備方法為：取各原料：琥珀酸7g/l，尿素2g/l，殼聚糖50mg/l；將各原料攪拌均勻后，調(diào)節(jié)ph為，121℃**15min，自然冷卻，制得發(fā)酵培養(yǎng)基b；采用常規(guī)發(fā)酵工藝：將黃色短桿菌gdk-9按8％接種量將種子液（od600nm為）接入裝有60l發(fā)酵培養(yǎng)基a的100l發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)24h，然后添加10l發(fā)酵培養(yǎng)基b，繼續(xù)發(fā)酵培養(yǎng)24h，收集發(fā)酵液；整個(gè)發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程中，控制發(fā)酵溫度35℃，通風(fēng)比1∶，攪拌轉(zhuǎn)速300r/min，溶氧維持在20％，流加質(zhì)量百分比濃度為20％的葡萄糖維持殘?zhí)遣坏陀冢?，流加消泡劑消泡。?shí)施例3一、cecl3稀土鹽對(duì)菌體濃度、谷氨酸含量以及糖酸轉(zhuǎn)化率的影響。

    另外，酚紅作為pH值的指示劑被加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中。酚紅在產(chǎn)物純化過(guò)程中會(huì)造成干擾，并且具有一定的固醇類***樣作用，如雌***樣作用。當(dāng)用于哺乳類動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)，可能會(huì)發(fā)生一些固醇類反應(yīng)?，F(xiàn)在商業(yè)化細(xì)胞培養(yǎng)基中的酚紅含量可根據(jù)需求調(diào)整。因生物反應(yīng)器具有pH在線檢測(cè)技術(shù)，生物反應(yīng)器培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，酚紅可完全去除。細(xì)胞保護(hù)劑是保護(hù)細(xì)胞免受滲透壓變化、剪切力、氧化及氣泡作用等引起的損傷的物質(zhì)。在使用生物反應(yīng)器培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞易被機(jī)械攪拌和通氣鼓泡產(chǎn)生的流體剪切力和氣泡作用所傷害甚至破損死亡。為降低這種損傷，除優(yōu)化生物反應(yīng)器結(jié)構(gòu)和生產(chǎn)工藝外，可在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一些保護(hù)劑。其主要是通過(guò)改變細(xì)胞培養(yǎng)基物性或是對(duì)細(xì)胞具有保護(hù)作用的物質(zhì)，常用的種類有血清、白蛋白、聚已二醇（PEG）、非離子性表面活性劑PluronicF68或是其他一些高分子聚合物等。3.細(xì)胞培養(yǎng)基的理化性質(zhì)動(dòng)物細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)基中不僅能存活，還要分裂增殖，合適的滲透壓、pH值等理化性質(zhì)是細(xì)胞培養(yǎng)基必須具備的前提條件。動(dòng)物細(xì)胞大多數(shù)需要輕微的堿性條件，適宜pH在～。細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值通常需經(jīng)校正的pH計(jì)來(lái)測(cè)定。在細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中，隨細(xì)胞數(shù)量的增多和代謝活動(dòng)的加強(qiáng)。MEM培養(yǎng)基在細(xì)胞培養(yǎng)中表現(xiàn)出高效的穩(wěn)定性。

    微量元素在細(xì)胞內(nèi)通常以與有機(jī)物結(jié)合的形式存在。其中鐵在細(xì)胞中參與氧的轉(zhuǎn)運(yùn)；鈷是維生素B12的組成部分，參與葉酸的合成和脂肪酸的合成；鎳能夠***脫氧核糖核酸酶、乙酰輔酶A合成酶等在細(xì)胞內(nèi)具有重要功能的酶，還具有穩(wěn)定核酸結(jié)構(gòu)的功能；亞硒酸鈉中的硒，作為谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的輔基，具有抗過(guò)氧化物能力，參與消除細(xì)胞內(nèi)的脂肪酸過(guò)氧化物，提高細(xì)胞的生長(zhǎng)速率和活性。在低血清、無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基中，為滿足細(xì)胞生長(zhǎng)增殖需要，常常添加一些成份：蛋白質(zhì)、多肽、核苷、嘌呤、檸檬酸循環(huán)的中間產(chǎn)物、脂類、及一些血清替代因子等。其中蛋白質(zhì)具有重要的作用，動(dòng)物細(xì)胞對(duì)許多物質(zhì)（難溶于水的離子或脂類物質(zhì)）的攝取需要借助蛋白質(zhì)的傳遞作用，如白蛋白、傳遞蛋白、貼壁蛋白等能夠攜帶脂肪酸、***、礦物質(zhì)等促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。轉(zhuǎn)鐵蛋白是一種重要的傳遞蛋白，能夠結(jié)合鐵，促進(jìn)細(xì)胞對(duì)鐵離子的吸收，并具有***作用，其促生長(zhǎng)作用可能與其具有生長(zhǎng)因子的功能有關(guān)。胰島素可促進(jìn)細(xì)胞對(duì)葡萄糖和氨基酸的利用，商業(yè)化中一些生長(zhǎng)因子以重組蛋白形式添加到培養(yǎng)基中，主要用來(lái)刺激細(xì)胞增殖，并可促進(jìn)糖元和脂肪酸的合成。乙醇胺是一種重要的刺激細(xì)胞生長(zhǎng)的化合物，是腦磷酸的合成前提。減血清培養(yǎng)基提高了細(xì)胞培養(yǎng)的重復(fù)性和可靠性。廣東培養(yǎng)基哪家便宜

無(wú)酚紅培養(yǎng)基在敏感細(xì)胞系的培養(yǎng)中表現(xiàn)優(yōu)越。遼寧RPMI1640培養(yǎng)基哪家便宜

    才能滿足新細(xì)胞合成、細(xì)胞代謝等生化反應(yīng)所需要的物質(zhì)和能量。細(xì)胞培養(yǎng)基的主要成份是水、氨基酸、維生素、碳水化合物、無(wú)機(jī)鹽和其它一些輔助營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等。此外，還可能含有血清、血清替代成分、pH指示劑等。水是細(xì)胞的主要成份，也是細(xì)胞賴以生存的主要環(huán)境。細(xì)胞培養(yǎng)液中90%以上的成份是水。細(xì)胞對(duì)水的品質(zhì)非常敏感，水的品質(zhì)將直接影響細(xì)胞培養(yǎng)的效果。而水中通常含有重金屬、氯、磷、有機(jī)物、熱原等污染物，細(xì)胞培養(yǎng)用水須經(jīng)過(guò)純化，品質(zhì)應(yīng)符合***典注射用水標(biāo)準(zhǔn)或者超純水的標(biāo)準(zhǔn)。能源和碳源是用于維持細(xì)胞生命和支持細(xì)胞生長(zhǎng)，主要包括糖、糖酵解的產(chǎn)物和谷氨酰胺，其他氨基酸是次要的能源和碳源物質(zhì)。細(xì)胞能夠利用的糖類主要是六碳糖，目前大多體外培養(yǎng)時(shí)選取葡萄糖作為細(xì)胞的主要碳源和能量來(lái)源，因此細(xì)胞培養(yǎng)基中基本都含有葡萄糖，含量一般為5～25mmol/L。在葡萄糖濃度較高時(shí)，細(xì)胞主要通過(guò)擴(kuò)散作用吸收葡萄糖，細(xì)胞膜內(nèi)外的葡萄糖濃度梯度是細(xì)胞吸收葡萄糖的動(dòng)力；在葡萄糖濃度較低時(shí)，主要由鈉離子推動(dòng)的高親和性轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程使細(xì)胞攝取葡萄糖。葡萄糖進(jìn)入細(xì)胞后參與糖酵解、核酸代謝、糖原合成、能量代謝以及一些氨基酸的合成。與體內(nèi)的能量供應(yīng)途徑不同。遼寧RPMI1640培養(yǎng)基哪家便宜