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阻斷cAMP的運(yùn)行,cGMP assaykit,使得β-類shen上腺激l素受體增加而用于治l療心率不齊、高血l壓、心肌埂塞和心力l衰竭。針對(duì)cAMP的特定Ⅱ型和Ⅳ 型腺苷酸環(huán)化酶的抑制l劑,正在進(jìn)行增強(qiáng)認(rèn)知方面的臨床測(cè)試。因此為篩選出腺苷酸環(huán)化酶激l活劑或磷酸二酯酶抑制l劑,需要一個(gè)高敏感度、特異性的、可重復(fù)的方案用于檢測(cè) cAMP的濃度。
試劑盒儲(chǔ)存要求
本試劑盒所有組分在有效期限內(nèi),于4℃穩(wěn)定保存。為了長(zhǎng)效的實(shí)驗(yàn),1000×儲(chǔ)液請(qǐng)保存于-80℃。本試劑盒未提供的必需試劑
1. 去離子水或蒸餾水。
2. 濃鹽酸。
3. 量程在5μL至1000μL之間的精密移液管。
4. 量程為50μL和200μL的中繼移液器。
5. 用于稀釋儲(chǔ)液的一次性燒杯。
6. 刻度量筒。
7. 微孔板振蕩器。
8. 吸水紙。
9. 酶標(biāo)l儀,可讀波長(zhǎng)450nm,在570nm至590nm之間應(yīng)有修正。
試劑準(zhǔn)備
1. 非乙酰化cAMP標(biāo)準(zhǔn)品
將5000 pmol/mL cAMP標(biāo)準(zhǔn)品溶液平衡至室溫。從#1至#6標(biāo)記六只潔凈試管。移取475μL 0.1M HCl到#1號(hào)試管,400μL到#2至#6號(hào)試管。加入25μL 5000 pmol/mL cAMP標(biāo)準(zhǔn)品到#1管中,劇烈渦旋震蕩。從#1管中取出100μL溶液至#2管中,渦旋震蕩。以此類推,重復(fù)上步操作,梯度稀釋至#6管。
經(jīng)以上操作,#1至#6管中cAMP標(biāo)準(zhǔn)品濃度分別為250,50,10,2,0.4和0.08 pmol/mL(詳見(jiàn)cAMP實(shí)驗(yàn)稀釋詳情鍵盤紙)。稀釋過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品需在30分鐘內(nèi)使用。
標(biāo)記一只試管作為無(wú)標(biāo)準(zhǔn)品空白對(duì)照(NSB)。移取600μL 0.1M HCl到NSB管中。
2. 洗滌液
將15 mL 10×洗滌液儲(chǔ)液加到135 mL去離子水中,稀釋成工作液。稀釋液可在室溫保存至試劑盒有效期限,或者3個(gè)月。
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