高架十字迷宮行為學(xué)檢測(cè)：

實(shí)驗(yàn)步驟

1、實(shí)驗(yàn)之前，臨床前動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，一定要確保高架十字迷宮整個(gè)裝置的清潔。這個(gè)步驟不僅僅是要求當(dāng)天的實(shí)驗(yàn)，可以做動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的公司，更加側(cè)重于每一次動(dòng)物實(shí)驗(yàn)完成后的清潔除味工作，一定要去除上一只動(dòng)物在宮體內(nèi)遺留下來(lái)的尿液、糞便等，盡可能創(chuàng)造一個(gè)清潔、無(wú)味道的理想試驗(yàn)環(huán)境。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)員需要記錄動(dòng)物的編號(hào)、日期、狀態(tài)等信息；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物提前運(yùn)送到行為學(xué)實(shí)驗(yàn)室臨時(shí)籠架 ，

適應(yīng)環(huán)境至少3H左右， 減少動(dòng)物緊張。

2、將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（大鼠或者小鼠）從飼養(yǎng)籠中取出，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物盡量背向?qū)嶒?yàn)員，將動(dòng)物輕輕放在儀器宮體的中央?yún)^(qū)域，動(dòng)物面向開(kāi)臂，然后實(shí)驗(yàn)員迅速安靜的離開(kāi)；

3、打開(kāi)SuperMaze或者VisuTrack動(dòng)物行為分析軟件，跟蹤動(dòng)物在高架十字迷宮儀器內(nèi)的軌跡運(yùn)動(dòng)，自動(dòng)計(jì)算指標(biāo)，通常實(shí)驗(yàn)時(shí)長(zhǎng)為5min；

4、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，取出實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型公司，放入飼養(yǎng)籠，做好實(shí)驗(yàn)完成動(dòng)物的標(biāo)記信息，同時(shí)，用酒精和紙巾清潔迷宮。

3輕柔刺激法

此方法在短期的睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用較多，當(dāng)實(shí)驗(yàn)人員通過(guò)觀察大鼠行為或通過(guò)腦電波監(jiān)護(hù)觀察到大鼠進(jìn)入睡眠時(shí)，通過(guò)輕輕拍打大鼠籠子或應(yīng)用聲音、光線的刺激促使大鼠保持清醒，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，必要時(shí)還可用紙卷、鉛筆或用手直接觸摸大鼠使大鼠無(wú)法進(jìn)入睡眠。注意不能將大鼠移出籠外!此方法簡(jiǎn)單易行，在腦電監(jiān)護(hù)情況下可進(jìn)行 TSD 或 SSD 實(shí)驗(yàn)，在無(wú)腦電監(jiān)護(hù)時(shí)需要實(shí)驗(yàn)人員在旁不間斷觀察大鼠行為，故較適合行短時(shí)間的睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)。

4睡眠剝奪法

定時(shí)給大鼠注she， 此類(lèi)方法簡(jiǎn)單易行，操作方便，不需要特殊儀器。缺點(diǎn)是大鼠存在個(gè)體差異， 睡眠剝奪的效果及程度及不易掌握。多用在研究某些特殊藥理作用的實(shí)驗(yàn)中。

siRNA 的作用原理

利用短寡核苷酸 siRNA 或能夠轉(zhuǎn)錄 siRNA 的 DNA 質(zhì)粒將雙鏈 RNA (dsRNA) 引入細(xì)胞。細(xì)胞中的 Dicer 蛋白將 dsRNA 消化為 21 bp 的 dsRNA (siRNA)。 siRNA 被整合到 RNA 誘導(dǎo)沉默復(fù)合體 (RISC) 中。在 RISC 復(fù)合體中，dsRNA 發(fā)生鏈分離。其反義鏈與細(xì)胞中的互補(bǔ)/靶 mRNA 雜交。活化 RISC 中的核酸酶降解靶 mRNA。斷裂的 mRNA 無(wú)法翻譯成蛋白質(zhì)。也就是說(shuō)蛋白質(zhì)無(wú)法表達(dá)，從而成功“敲除”蛋白質(zhì)。

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