yao物對細(xì)胞的IC50檢測  

     IC50 (half maximal inhibitory concentration)是指被測量的拮抗劑的半抑制濃度。它能指示某一yao物或者物質(zhì)(yi制劑)在抑制某些生物程序(或者是包含在此程序中的某些物質(zhì)，比如酶，細(xì)胞周期，細(xì)胞受體或是微生物)的半量。在凋亡方面，細(xì)胞，可以理解為一定濃度的某種藥wu誘導(dǎo)腫liu細(xì)胞凋亡50%，該濃度稱為50%抑制濃度，感受態(tài)細(xì)胞，即凋亡細(xì)胞與全部細(xì)胞數(shù)之比等于50%時(shí)所對應(yīng)的濃度，IC50值可以用來衡量yao物誘導(dǎo)凋亡的能力，即誘導(dǎo)能力越強(qiáng)，該數(shù)值越低，當(dāng)然也可以反向說明某種細(xì)胞對yao物的耐受程度。

二、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染操作步驟

1、操作步驟 [方法一]：

(1) 細(xì)胞培養(yǎng)：取 6 孔培養(yǎng)板 (或用 35 mm 培養(yǎng)皿)，細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)報(bào)告，向每孔中加入 2 mL 含 1～2×105 個細(xì)胞培養(yǎng)液，37℃ CO2 培養(yǎng)至 40%～60% 匯合時(shí) (匯合過分，轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞)。

(2) 轉(zhuǎn)染液制備：在聚苯乙稀管中制備以下兩液 (為轉(zhuǎn)染每一個孔細(xì)胞所用的量)A 液：用不含培養(yǎng)基稀釋 1-10 μg DNA，終量 100μL，B 液：用不含培養(yǎng)基稀釋 2-50 μgLR，終量 100μL，輕輕混合 A、B 液，室溫中置 10-15 分鐘，稍后會出現(xiàn)微濁現(xiàn)象，但并不妨礙轉(zhuǎn)染 (如出現(xiàn)沉淀可能因 LR 或 DNA 濃度過高所致，應(yīng)酌情減量)。

(3) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備：用 2 mL 不含培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入 1 mL 不含培養(yǎng)液。

(4) 轉(zhuǎn)染：把 A/B 復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻，37℃ 溫箱置 6～24 小時(shí)，吸除無轉(zhuǎn)染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

(5) 其余處理如觀察、篩選、檢測等與其它轉(zhuǎn)染法相同。

注意：轉(zhuǎn)染時(shí)切勿加，對轉(zhuǎn)染效率有很大影響。

自噬流檢測

自噬是調(diào)節(jié)真核細(xì)鵬生長、和能量代謝的重要生物學(xué)機(jī)制。細(xì)胞自噬行使其生物學(xué)功能的前提是自噬流的話化。大量證據(jù)表明自噬流受損與多種慢性炎性疾病，特別是、神經(jīng)退行性疾病及組織纖維化的發(fā)病密切相關(guān)，目前對于自噬液的檢別是自噬與其相關(guān)疾病研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。由于自噬流是一個曲多個步驟組成的動態(tài)過程。因此往需要精細(xì)的突驗(yàn)才能準(zhǔn)確判斷自啦流狀態(tài)。

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