病理實驗外包，南京英瀚斯可開展冰凍切片熒光染色1.  冰凍切片室溫晾干15 min，可用含10%正常山羊的PBS室溫封閉切片1小時（此步可不洗）。2.  滴加適當比例稀釋的一抗或一抗工作液（的量視組織大小而定，原則是可以均勻覆蓋組織面，且保證整個過程中不會使組織干涸）。3.  將切片放在加了PBS的組化濕盒，室溫孵育2小時或4℃過夜。4.  第二天先將濕盒放到37℃回溫1 h，然后吸取片上的一抗進行回收，將切片插入到小染缸PBS沖洗。5.  滴加用PBS稀釋好的二抗（避光）置于分子雜交箱中37℃孵育1小時?；厥斩?，切片置于染缸內(nèi)，PBS洗5 min×3次。6.  滴加DAPI工作液染核，室溫10~20 min（工作濃度0.1%染色15 min）。7.  回收DAPI，掃描電鏡原理，滴加5-10 μl 抗熒光衰減封或中性樹膠，用處理干凈的蓋玻片封片，即可到熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下。8.  做好的片放在切片盒內(nèi)，置于4℃冰箱，可保存一周左右。

 病理實驗外包，病理染色切片常見問題及解決方法：1.切片彎曲且不能形成直帶

●原因：①蠟塊上下或左右兩邊不平行。②蠟塊與切片刀刀口不平行。③組織塊外形不整齊。④切片刀各處的鋒利程度不一致。

●解決方法：①將蠟塊四邊反復修平對稱。②調(diào)節(jié)蠟塊夾持器，使其與切片刀平行。③修整組織塊時，sem掃描電鏡，注意修切整齊。④移動切片刀，更換刀口位置。2.切片上出現(xiàn)裂紋

●原因：①切片刀上有小缺口，或刀口不平整。②組織中可能含有較硬之物質(zhì)，如固定液之結(jié)晶石灰質(zhì)。③包埋時石蠟凍結(jié)太慢。

●解決方法：①切片刀某處有缺口，透射電鏡，可調(diào)換刀口部位或重新磨刀。刀口上缺口過多且不平整，可先將刀鋒垂直在磨刀石上輕輕磨數(shù)次，然后按常規(guī)磨刀田。②組織中硬性物質(zhì)太多，掃描電鏡，則不宜用。③糾正包埋時的缺點。一般待蠟塊周圍凝結(jié)一層，即可放入冷水中。南京英瀚斯，的病理染色實驗服務(wù)平臺。

肺纖維化的病理特點為肺部引起肺泡反復持續(xù)性損傷及細胞外基質(zhì)的破壞、修復和過度沉積。該病嚴重影響患者生存質(zhì)量，預后極差。由于該病發(fā)病機制到目前為止尚不清楚，臨床上也缺乏相應(yīng)的有效手段，患者病死率居高不下，因此建立一個可靠穩(wěn)定的肺纖維化動物模型是探索其發(fā)病機制和開發(fā)有效的重要前提，實驗中常用的肺纖維化誘導劑主要有、、二氧化硅、石棉、線、呼腸病毒、野百合堿等，在這些誘導劑中，以使用為廣泛，己成為經(jīng)典的動物肺纖維化模型的誘導劑。

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