實(shí)驗(yàn)動物的給法

(一)注she給藥法

1. 皮射 注she時(shí)用左手拇指及食指輕輕捏起皮膚，右手持將針頭刺入，固定后即可進(jìn)行注射。一般小鼠在背部或前肢腋下，動物模型實(shí)驗(yàn)，大鼠在背部或側(cè)下腹部；豚鼠在后大腿內(nèi)側(cè)、背部等脂肪少的部位；兔在背部或耳根部注she；蛙可在脊背部淋巴囊注射；狗多在大腿外側(cè)注she，拔針時(shí)，輕按片刻，防藥液逸出。

2. 皮內(nèi)注she 此法用于觀察皮膚血管的通透性變化或觀察皮內(nèi)反應(yīng)。 如將一定量的性同位素溶液、顏料或致炎物質(zhì)、等注入皮內(nèi)，觀察其消失速度和局部血液循環(huán)變化，作為皮膚血管通透性觀察指標(biāo)之一。方法是：將動物注射部位的毛剪去，消毒后，用皮試針頭緊貼皮膚皮層刺入皮內(nèi)，然后使針頭向上挑起并再稍刺入，即可注射藥液。注射后可見皮膚表面鼓起一白色小皮丘。

3. 肌肉注she 當(dāng)給動物注she不溶于水而混懸于油或其他溶劑中的時(shí)，常采用肌肉注she。肌肉注she一般選用肌肉發(fā)達(dá)、無大血管經(jīng)過的部位，多選臀部。

注she時(shí)針頭要垂直快速刺入肌肉，如無回血現(xiàn)象即可注she。給大、小鼠作肌肉注she時(shí)，選大腿外側(cè)肌肉進(jìn)行注she。

4. 腹腔注she 先將動物固定，腹部用酒精棉球擦試消毒，然后在左或右側(cè)腹部將針頭刺入皮下，沿皮下向前推進(jìn)約0.5厘米，再使針頭與皮膚呈45 度角方向穿過腹肌刺入腹腔，此時(shí)有落空感，回抽無腸液、尿液后，緩緩?fù)迫胨幰?。此法大小鼠用的較多。

5. 靜脈注she 是將藥液直接注she于靜脈管內(nèi)，使其隨著血液分布全身，迅速奏效。但排泄較快，作用時(shí)間較短。

小鼠、大鼠的靜脈注she：常采用尾靜脈注she。鼠尾靜脈共有3根， 左右兩側(cè)和背側(cè)各1根，兩側(cè)尾靜脈比較容易固定，故常被采用。操作時(shí)，先將動物固定在暴露尾部的固定器內(nèi)(可用燒杯、鐵絲罩或粗試管等物代替)，眉山動物模型，用75％酒精棉球反復(fù)擦試使血管擴(kuò)張， 并可使表皮角質(zhì)軟化，以左手拇指和食指捏住鼠尾兩側(cè)，使靜脈充盈，注she時(shí)針頭盡量采取與尾部平行的角度進(jìn)針。

雄ji素多囊卵chao綜合征動物模型

  方法①丙酸gao丸酮造模法：選出生后9d齡雌性大鼠，按1.25mg/只的劑量經(jīng)頸背部一次性皮注she丙酸gao丸酮，21d齡斷乳后動物常規(guī)飼養(yǎng)，自由飲水和進(jìn)食。模型動物70d齡起連續(xù)作涂片11d，觀察到上皮持續(xù)角化者即為造模成功。模型動物xue清中4-xiong烯二酮、總gao酮、游離gao酮、胰島素(Ins)和C-肽均顯著升高。②脫氫表雄酮造模法：選23d齡幼年雌性大鼠，按6mg/100g體重的劑量每天經(jīng)皮注she脫氫表雄酮，基因敲除，連續(xù)20d。注she脫氫表雄酮后，模型動物的luan巢重量顯著增加并呈多囊樣改變，對閉鎖luan泡進(jìn)行顯微測量其平均直徑明顯增大。模型動物血qingT、E2和空腹血糖水平明顯升高，空腹及服糖后2h血胰島素水平顯著升高。

2 雌多囊卵chao綜合征動物模型

方法  選用未交配雌性成年大鼠，一次性注she戊酸雌二醇2mg/只，16～20d后大鼠上皮出現(xiàn)持續(xù)角化。出現(xiàn)大量閉鎖luan泡，可以做動物實(shí)驗(yàn)的公司，由于正常luan泡數(shù)減少luan巢體積縮小的。xue清LH和FSH水平在10～12d時(shí)降至zui低，以后逐漸上升至56d時(shí)恢復(fù)正常。至56dluan巢呈現(xiàn)多囊樣改變，6個(gè)月后該病理改變呈漸進(jìn)性發(fā)展趨勢。

前l(fā)ie腺素E2對大鼠巨噬細(xì)胞株NR8383 合成血管內(nèi)皮生長因子促進(jìn)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞成管、遷移的影響

　　方法：分別采用0.1 nmol/L PGE2、1 nmol/L PGE2、1 nmol/L PGE2 10 nmol/L EP2受體抑zhi劑AH6809 10 nmol/L EP4受體抑zhi劑AH23848 處理的NR8383 細(xì)胞作為各實(shí)驗(yàn)組，選擇未經(jīng)PGE2以及其特異性受體抑zhi劑處理的NR8383 細(xì)胞作為對照組，采用Western blot 和qPCR方法檢測各組NR8383細(xì)胞內(nèi)VEGF蛋白以及mRNA的表達(dá)水平；收集以上各處理組的細(xì)胞培養(yǎng)上清液分別刺激1HUVECs，運(yùn)用TRANSWELL 小室、Matrigel 膠細(xì)胞成管實(shí)驗(yàn)等實(shí)驗(yàn)方法，觀察PGE2調(diào)控巨噬細(xì)胞對HUVEC 遷移效應(yīng)和成管能力的影響。

　　結(jié)果：隨著NR8383 細(xì)胞培養(yǎng)液中加入PGE2濃度增gao，其 VEGF蛋白表達(dá)和VEGF mRNA的表達(dá)水平顯著升高（P<0.05）；0.1 nmol/L、1 nmol/L PGE2處理過的NR8383細(xì)胞培養(yǎng)上清液可以顯著增加HUVEC細(xì)胞形成的小管面積，形成小管面積隨著PGE2處理濃度的增加而增加（P<0.05）；HUVECs的遷移運(yùn)動也隨著PGE2處理濃度的升高不同程度的增強(qiáng)，HUVECs趨化的數(shù)量顯著升高（P<0.05）；研究發(fā)現(xiàn)PGE2特異性的EP2/EP4 受體拮抗劑AH6809/AH23848，可以顯著抑制PGE2 增強(qiáng)NR8383 細(xì)胞內(nèi)VEGF mRNAs 表達(dá)的作用并且也顯著抑制PGE2 增強(qiáng) NR8383細(xì)胞促進(jìn)HUVECs成管和趨化能力的效應(yīng)（P<0.05）。

　

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