細(xì)胞分化

細(xì)胞分化是指同一來(lái)源的細(xì)胞逐漸產(chǎn)生出形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能特征各不相同的細(xì)胞類群的過(guò)程，其結(jié)果是在空間上細(xì)胞產(chǎn)生差異，在時(shí)間上同一細(xì)胞與其從前的狀態(tài)有所不同。細(xì)胞分化的本質(zhì)是基因組在時(shí)間和空間上的選擇性表達(dá)，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)外包選哪家，通過(guò)不同基因表達(dá)的開(kāi)啟或關(guān)閉，終產(chǎn)生標(biāo)志性蛋白質(zhì)。細(xì)胞誘導(dǎo)是指將一群不同類型或者形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能特征存在差異的細(xì)胞通過(guò)生物學(xué)、物理學(xué)等手段，將之轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂邢嗨?相同形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能特征的細(xì)胞群體的過(guò)程。

小鼠精原gan細(xì)胞分離富集和培養(yǎng)

成年小鼠gao丸中約有108個(gè)細(xì)胞，其中約有 2×104個(gè)是精原gan細(xì)胞，僅占gao丸生精上皮細(xì)胞總數(shù)的 0.02～0.03%，精原gan細(xì)胞數(shù)量太少不利于體外培養(yǎng).分離和富集精原gan細(xì)胞成為精原gan細(xì)胞體外培養(yǎng)能否成功的前提條件.尋找分離和富集小鼠精原gan細(xì)胞有效方法. 方法:出生6-8天小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，先用0.25%胰酶1mM EDTA消化gao丸10min，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)外包費(fèi)用，用胎牛xue清終止消化，用一次40-um孔徑的濾器過(guò)慮制成單 細(xì)胞懸液，30%percoll不連續(xù)密度梯度法離心富集精原gan細(xì)胞，雅安細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，再根椐未分化精原gan細(xì)胞表面thy1.2(CD90.2)陽(yáng)性CD117(c- kit)陰性特點(diǎn)用流式細(xì)胞儀將精原gan細(xì)胞分選出來(lái)，并在體外進(jìn)行培養(yǎng)嘗試. 結(jié)果:30%percoll密度梯度離心前CD117(c-kit)陽(yáng)性細(xì)胞占13.80±3.34%，CD90.2陽(yáng)性細(xì)胞占28.98±4.51%， 二者都陽(yáng)性細(xì)胞占8.98±2.98%，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)外包哪家好，CD117陰性CD90.2陽(yáng)性細(xì)胞占18.36±2.67%;離心后 CD117(c-kit)陽(yáng)性細(xì)胞占12.37±3.34%，CD90.2陽(yáng)性細(xì)胞占56.98±4.51%，二者都陽(yáng)性細(xì)胞占 8.20±3.98%，CD117陰性CD90.2陽(yáng)性細(xì)胞占32.36±3.67%;CD117(c-kit)陽(yáng)性細(xì)胞和二者都陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比前后 比較差異無(wú)顯著性(P>0.1)，CD90.2陽(yáng)性細(xì)胞和CD117陰性和CD90.2陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比前后比較差異有顯著性 (P<0.05);采用CD117和CD90.2作為標(biāo)志分子，percoll離心后細(xì)胞懸液經(jīng)FACS分選后獲得細(xì)胞純度

細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)的生物污染包括細(xì)菌污染、霉菌污染、支原體污染、黑點(diǎn)污染、真菌污染和原生動(dòng)物污染。這些污染在細(xì)胞培養(yǎng)中的特點(diǎn)及相應(yīng)的解決辦法如下：

1.細(xì)菌污染

細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下呈黑色和細(xì)砂狀。根據(jù)gan染菌的種類不同，可能會(huì)呈現(xiàn)不同的形狀，培養(yǎng)液一般會(huì)變得渾濁、黃色，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有明顯影響。

解決方法：仔細(xì)檢查器具的滅菌情況，確保通風(fēng)時(shí)間和高壓滅菌器的壓力是否足夠。重要的是，與培養(yǎng)基接觸的移液管等物品如果被污染兩次，則可能會(huì)導(dǎo)致儲(chǔ)存溶液也受到污染。所以一定要注意！下次使用前要檢查培養(yǎng)基的渾濁度。此外，建議在培養(yǎng)基中添加抗生su。

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