1、要保證移液的準(zhǔn)確性，誤差不能超過2%?？捎盟碗娮犹炱竭M(jìn)行確定。但有人員進(jìn)行矯正。

2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排各一支。吸取不同的液體后，要更換頭。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)。

3、要在實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出，Mouse cGMP kit，使各種試劑都恢復(fù)到室溫，以使結(jié)果更穩(wěn)定。

4、實(shí)驗(yàn)時(shí)，要使底物避光保存。

5、用吸取液體時(shí)速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。

6、吸取液體時(shí)，要用量程和需要量接近的去吸，減少誤差。

試劑準(zhǔn)備

1. 非乙?；痗AMP標(biāo)準(zhǔn)品

將5000 pmol/mL cAMP標(biāo)準(zhǔn)品溶液平衡至室溫。從#1至#6標(biāo)記六只潔凈試管。移取475μL 0.1M HCl到#1號試管，400μL到#2至#6號試管。加入25μL 5000 pmol/mL cAMP標(biāo)準(zhǔn)品到#1管中，劇烈渦旋震蕩。從#1管中取出100μL溶液至#2管中，渦旋震蕩。以此類推，重復(fù)上步操作，梯度稀釋至#6管。

經(jīng)以上操作，#1至#6管中cAMP標(biāo)準(zhǔn)品濃度分別為250，50，10，2，0.4和0.08 pmol/mL（詳見cAMP實(shí)驗(yàn)稀釋詳情鍵盤紙）。稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品需在30分鐘內(nèi)使用。

標(biāo)記一只試管作為無標(biāo)準(zhǔn)品空白對照（NSB）。移取600μL 0.1M HCl到NSB管中。

2. 洗滌液

將15 mL 10×洗滌液儲(chǔ)液加到135 mL去離子水中，稀釋成工作液。稀釋液可在室溫保存至試劑盒有效期限，或者3個(gè)月。

本試劑盒利用競爭酶聯(lián)免l疫分析方法來測定細(xì)胞提取物或體外腺苷酸環(huán)化酶實(shí)驗(yàn)中的cAMP的水平。簡而言之，將羊抗鼠多克l隆抗l體包被在酶標(biāo)板上，細(xì)胞提取物或體外腺苷酸環(huán)化酶實(shí)驗(yàn)中的cAMP與固定數(shù)量的偶聯(lián)辣根過氧化物酶的cAMP或堿性磷酸酶競爭性的結(jié)合抗cAMP單克l隆抗l體，已知的cAMP作為標(biāo)準(zhǔn)品來做標(biāo)準(zhǔn)曲線。經(jīng)過一段時(shí)間孵育，洗掉所有試劑，加入底物進(jìn)行顯色。將多孔板置于酶標(biāo)l儀上，于450nm或405nm波長下，進(jìn)行讀數(shù)。黃色的光強(qiáng)度與樣品中cAMP的濃度呈反比關(guān)系?；赾AMP標(biāo)準(zhǔn)品所得曲線，通過測得的光密度可以計(jì)算出樣品中cAMP的濃度。

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