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一、高l效、靈敏、特異的抗l體;二、穩(wěn)定的重復性和可靠性;三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;四、適用血l清、血漿、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標本類型;五、節(jié)省實驗經(jīng)費。
武漢紐斯特生物科技有限公司(WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd),系美國生命科學試劑供應商美國NewEastBio在中國的子公司。公司位于武漢東湖高新技術開發(fā)區(qū)光谷生物城.美國NewEastBio專注于生命科學和生物技術領域,主要產(chǎn)品有小分子、ELISA試劑盒、蛋白等,與世界高校和研究所、世界大制藥公司、生物科技公司和醫(yī)院等客戶建立了長期穩(wěn)定的合作關系,產(chǎn)品銷往。
體外用GTPγS/GDP處理蛋白以用作陽性和陰性的對照
注意:在細胞體內(nèi)環(huán)境條件下大約有10%的Ras被激l活,而在體外用GTPγS處理大約有90%的Ras被激l活。
1.
準備兩個離心管,每個管中各加入0.5 mL的細胞提取物(如果是純的Ras蛋白則每個管中加入的蛋白量為1ug)。
2.
每個管中加入20ul 0.5M EDTA(終濃度即為20 mM)。
3.
一個管中加入5ul的100X GTPγS(終濃度即為100 uM)作為陽性對照。另一個管中加入5ul的100X GDP(終濃度即為1 mM)作為陰性對照。
4.
將離心管置于30°C條件下反應30 min并不斷攪動。
5.
終止反應:將管置于冰上并加入32.5ul 1M MgCl2(終濃度即為60mM)。
靈敏度
通過比較10個B0孔平均光密度值(OD)和10個5號管標準品的平均光密度值,計算出靈敏度。cAMP濃度的檢測極限通過標準曲線上0位置的兩個標準偏差來測定。
OD(B0平均數(shù)) =0.685± 0.003
OD(5號 標準品平均數(shù))=0.604± 0.010
光密度偏差(0-0.4 pmol/mL) =0.081
2 SD"s of the Zero Standard =0.006
靈敏度 =081.0006.0/0.8×0.4 pmol/mL =29.6 fmol/mL
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