3.引物的OD數(shù)如何定量？

答：引物合成引物OD數(shù)是這樣測(cè)定的：用紫外分光光度計(jì)，波長(zhǎng)260nm，石英比色杯，光程為1厘米，測(cè)定溶液的光密度。測(cè)定時(shí)溶液的光密度好稀釋到0.2-1.0之間。DNA干粉用一定體積的水充分振蕩溶解以后，用1ml水稀釋測(cè)OD值。需要根據(jù)稀釋倍數(shù)換算出母液的OD值。

4.需要什么級(jí)別的引物？

答：引物常用的純化方式脫鹽、BioRP / OPC純化、PAGE純化、HPLC純化。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，確定訂購(gòu)引物的純度級(jí)別。

動(dòng)物組織細(xì)胞基因組DNA提取

操作步驟

1. 取新鮮或冰凍動(dòng)物組織塊0.1g（0.5cm3），盡量剪碎。置于玻璃勻漿器中，加入1ml的細(xì)胞裂解緩沖液勻漿至不見(jiàn)組織塊，轉(zhuǎn)入1.5ml 離心管中，加入蛋白酶K

（500ug/ml）20μl，混勻。在65℃恒溫水浴鍋中水浴30min，也可轉(zhuǎn)入37℃水浴12～24h，間歇振蕩離心管數(shù)次。于臺(tái)式離心機(jī)以12000 rpm離心5min，取上清液入另

一離心管中。

2.加2倍體積異，倒轉(zhuǎn)混勻后，可以看見(jiàn)絲狀物，用100ul 吸頭挑出，涼干，用200ul TE 重新溶解。（可進(jìn)行PCR反應(yīng)等，需要進(jìn)一步純化的按下列步驟進(jìn)行）

3.加等量的酚??振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。

4.取上層溶液至另一管，加入等體積的?，振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。

5. 取上層溶液至另一管，加入1/2體積的7.5mol/L氨加入2倍體積的無(wú)水乙醇，混勻后室溫沉淀2min ，離心12000 rpm ，10min。

6.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉。

7.用1ml 70%乙醇洗滌沉淀物1次，四川pcr，離心12000 rpm ， 5min。

8.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉，室溫干燥。

9.加200ul TE重新溶解沉淀物，然后置于4℃或?C20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

10.吸取適量樣品于GeneQuant上檢測(cè)濃度和純度。

22.同樣的OD用PAGE檢測(cè)，EB染色為什么深淺不一？

答：通?？梢杂肊B染色的方法來(lái)判斷雙鏈DNA的量(如質(zhì)粒DNA)，因?yàn)镋B可以嵌合到雙鏈DNA中。而合成的單鏈DNA，由于堿基組成不同，形成二級(jí)結(jié)構(gòu)的可能性不同，EB的染色程度也會(huì)有差異，比如Oligo(dT)等不形成二級(jí)結(jié)構(gòu)，pcr實(shí)驗(yàn)室，EB染色效果就非常差。所以不要用EB染色的方法來(lái)定量，而用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)。同樣道理，用EB染色來(lái)照片不適合所有引物。

23.引物不純會(huì)有什么后果？

答：引物不純可能會(huì)導(dǎo)致：1)非特異性擴(kuò)增；2)無(wú)法用預(yù)先設(shè)計(jì)在引物5′端酶切位點(diǎn)的酶切開，特別是沒(méi)有保護(hù)堿基的引物；3) 用于測(cè)序出現(xiàn)雙峰或亂峰。解決辦法重新合成或重新純化。

24.已經(jīng)溶解的引物，為什么原先使用正常，而過(guò)一段時(shí)間再使用就不好了？

答：如果溶解引物的水PH過(guò)低或污染了菌或核酸酶，會(huì)使引物降解。使用時(shí)沒(méi)有充分解凍混合，基因檢測(cè)多少錢，液體不均勻也可能會(huì)造成引物加入量不準(zhǔn)確。建議分裝引物，dna檢測(cè)，避免反復(fù)凍溶。建議使用10mMT ris pH7.5緩沖液溶解引物，因?yàn)橛行┱麴s水的pH值比較低（pH4-5）， 引物在這種條件下不穩(wěn)定。還有一種可能性是引物沒(méi)有問(wèn)題，而是PCR使用材料特別是模板的質(zhì)量與先前使用的不完全一致。

基因檢測(cè)多少錢-四川pcr-英瀚斯生物科技由南京英瀚斯生物科技有限公司提供。“組織病理,細(xì)胞生物,分子生物學(xué)平臺(tái),動(dòng)物模型科研外包服務(wù)”選擇南京英瀚斯生物科技有限公司，公司位于：江蘇省南京市棲霞區(qū)和燕路371號(hào)東南大學(xué)國(guó)家大學(xué)科技園科創(chuàng)樓A301，多年來(lái)，英瀚斯堅(jiān)持為客戶提供好的服務(wù)，聯(lián)系人：戴經(jīng)理。歡迎廣大新老客戶來(lái)電，來(lái)函，親臨指導(dǎo)，洽談業(yè)務(wù)。英瀚斯期待成為您的長(zhǎng)期合作伙伴！