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基因敲除-英瀚斯(在線咨詢)-達(dá)州動物模型

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發(fā)布時間:2022-09-23 05:10  





在各種致病因素作用下,大腦實質(zhì)受到損傷后可出現(xiàn)神經(jīng)功能改變,如偏癱、平衡失調(diào)等。

對于神經(jīng)系統(tǒng)疾病動物模型而言,造模結(jié)束只是步,驗證個體模型是否成功是第二步,而控制組內(nèi)個體特征一致性是第三步。

采用神經(jīng)功能評分是重要的觀察指標(biāo),可以用來在體評價模型是否成功或者病變嚴(yán)重程度。盡量控制動物模型的評分一致性是很困難但不得不做的一件事。

這里介紹三種常見的嚙齒類神經(jīng)功能評分方法。


一、【Longa評分法】

① 無神經(jīng)功能缺陷:0分;

②癱瘓側(cè)前爪不能完全伸展:1分;

③行走時向癱瘓側(cè)轉(zhuǎn)圈:2分;

④行走時向癱瘓側(cè)傾倒:3分;

⑤不能自動行走,存在意識喪失現(xiàn)象:4分。

二、【Bederson評分法】

抓起動物的尾巴,使動物離臺面10cm高。此時,正常大鼠的前爪處于伸直狀態(tài),而存在神經(jīng)功能病變的動物則可出現(xiàn)如下表現(xiàn):

① 無神經(jīng)功能缺陷:0分;

②動物尾巴提起后,可以做動物實驗的公司,癱瘓側(cè)前肢回收并屈于腹下,而正常側(cè)肢體伸向臺面:1分;

③除第二條表現(xiàn)以外,俯臥于臺面時向癱瘓側(cè)側(cè)推動物的阻力較正常側(cè)明顯降低:2分;

④除條和第二條以外,動物行走時向癱瘓側(cè)旋轉(zhuǎn):3分。

三、【平衡木評分法】

一根長為80cm、寬為2.5cm的木條,水平固定在離臺面10cm高度的地方,然后讓動物在木條上行走。

①能跳上平衡木條,可以自由行走但不跌倒:0分;

②能跳上平衡木條,動物在上面行走會跌下,但跌下的機會小于50%:1分;

③能跳上平衡木條,動物在上面行走會跌下,但跌下的機會大于50%:2分;

④動物在正常側(cè)身體的幫助下可以跳上平衡木條;但是癱瘓側(cè)的后肢不能夠幫助身體向前移動:3分;

⑤動物無法在平衡木條上行走,但是可以坐在木條上:4分;

⑥將動物放在木條上,動物很快會掉落下來:5分。









注意事項

1. 針頭大小與動物的種類有關(guān),t 同時針頭一定要磨鈍。

2. 檢查灌注泵的運作情況,一定排出管子的氣泡和空氣,防止空氣栓塞。

3. 經(jīng)腹腔暴腔,先清楚升主動脈外面的脂肪組織和心外膜組織。

4. 將針頭經(jīng)左心室插入升主動脈(顏色變白的哦),并用鉗子固定。

5. 解開右心耳,同時開啟灌注泵。注意,不要隨便揭開心臟的其他部位,基因敲除,否則有時候可能會灌注成功但是絕大部分會造成灌注不成功,尤其。

6. 將 4 度的生理鹽水(好已動物的發(fā)白為標(biāo)準(zhǔn),我們實驗室的大鼠約用 250ml)和多聚甲醛 (根據(jù)所取得材料而定) 依次灌入。

7. 整個過程均應(yīng)將動物放在冰上,以便于更好地保存目的蛋白和酶的活性。







難點與關(guān)鍵點

將灌注針插入主動脈內(nèi)是灌注固定的關(guān)鍵,也是難點。首先準(zhǔn)確找到主動脈,這是此步驟的要點??捎脺厣睇}水將胸腔內(nèi)的血液沖洗干凈,用鑷子輕輕夾住心 外膜(夾的越少越好,以免影響取材)將心臟向左上方提起,即可看清主動脈,又可使灌注針很容易地插入主動脈內(nèi)。插入時動作要慢,針尖方向不要偏向右側(cè),以 免刺入右心房,達(dá)州動物模型,如果感到有阻力,動物模型購買,則將針退后、調(diào)整方向重新進(jìn)針,直到進(jìn)入主動脈,灌注針進(jìn)入主動脈后可在心臟的上方看到其位置,灌注針進(jìn)入主動脈的長度 好為 3~5 毫米,然后用絲線扎緊。切勿將灌注針放在左心室內(nèi),這樣由于主動脈瓣的關(guān)閉,灌注液很難進(jìn)入主動脈,而是沿著心室的切口流出,致使灌注失敗。另 外,灌注針插入成功后,一定要用剪刀剪開右心耳而不是右心室,這是灌流液的出口。剪開心尖的位置一定要掌握好,不能偏右使灌注針插入右心室。










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