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實(shí)驗(yàn)步驟
1、實(shí)驗(yàn)之前,一定要確保高架十字迷宮整個(gè)裝置的清潔。這個(gè)步驟不僅僅是要求當(dāng)天的實(shí)驗(yàn),更加側(cè)重于每一次動(dòng)物實(shí)驗(yàn)完成后的清潔除味工作,一定要去除上一只動(dòng)物在宮體內(nèi)遺留下來(lái)的尿液、糞便等,可以做動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的公司,盡可能創(chuàng)造一個(gè)清潔、無(wú)味道的理想試驗(yàn)環(huán)境。同時(shí),動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)員需要記錄動(dòng)物的編號(hào)、日期、狀態(tài)等信息;實(shí)驗(yàn)動(dòng)物提前運(yùn)送到行為學(xué)實(shí)驗(yàn)室臨時(shí)籠架 ,
適應(yīng)環(huán)境至少3H左右, 減少動(dòng)物緊張。
2、將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(大鼠或者小鼠)從飼養(yǎng)籠中取出,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物盡量背向?qū)嶒?yàn)員,將動(dòng)物輕輕放在儀器宮體的中央?yún)^(qū)域,動(dòng)物面向開臂,然后實(shí)驗(yàn)員迅速安靜的離開;
3、打開SuperMaze或者VisuTrack動(dòng)物行為分析軟件,跟蹤動(dòng)物在高架十字迷宮儀器內(nèi)的軌跡運(yùn)動(dòng),自動(dòng)計(jì)算指標(biāo),通常實(shí)驗(yàn)時(shí)長(zhǎng)為5min;
4、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,取出實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,放入飼養(yǎng)籠,貴州動(dòng)物實(shí)驗(yàn),做好實(shí)驗(yàn)完成動(dòng)物的標(biāo)記信息,同時(shí),臨床前動(dòng)物實(shí)驗(yàn),用酒精和紙巾清潔迷宮。
注意事項(xiàng)
1. 針頭大小與動(dòng)物的種類有關(guān),t 同時(shí)針頭一定要磨鈍。
2. 檢查灌注泵的運(yùn)作情況,一定排出管子的氣泡和空氣,防止空氣栓塞。
3. 經(jīng)腹腔暴腔,先清楚升主動(dòng)脈外面的脂肪組織和心外膜組織。
4. 將針頭經(jīng)左心室插入升主動(dòng)脈(顏色變白的哦),并用鉗子固定。
5. 解開右心耳,同時(shí)開啟灌注泵。注意,不要隨便揭開心臟的其他部位,否則有時(shí)候可能會(huì)灌注成功但是絕大部分會(huì)造成灌注不成功,尤其。
6. 將 4 度的生理鹽水(好已動(dòng)物的發(fā)白為標(biāo)準(zhǔn),我們實(shí)驗(yàn)室的大鼠約用 250ml)和多聚甲醛 (根據(jù)所取得材料而定) 依次灌入。
7. 整個(gè)過(guò)程均應(yīng)將動(dòng)物放在冰上,以便于更好地保存目的蛋白和酶的活性。
高架十字迷宮試驗(yàn) :
EPM ) 既可以建立焦躁應(yīng)激的模型也是國(guó)際上公認(rèn)的經(jīng)典測(cè)量焦躁反應(yīng)的方法。其原理是利用動(dòng)物對(duì)新異環(huán)境的探究特性和對(duì)高懸敞開臂的恐 懼心理, 形成動(dòng)物的矛盾沖突來(lái)考察大鼠的焦躁?duì)顟B(tài)。 EPM 測(cè)試的項(xiàng)目中, 焦躁動(dòng)物的 OE% 和 OT% 會(huì)明顯降低, 經(jīng)典抗焦躁藥則使兩者升高, OE CE 反映了動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)活性。本研究發(fā)現(xiàn)模型組大鼠的 OE% 和 OT% 顯著下降, 運(yùn)動(dòng)活性也降低。HD反映了動(dòng)物在非保護(hù)區(qū)內(nèi)的探索行為, 代表動(dòng)物對(duì)陌生環(huán)境的好奇探究或因恐懼而尋求逃避, 與焦躁程度有一定相關(guān)性, 本研究中空瓶應(yīng)激后的大鼠 HD行為減少; RR可用來(lái)觀察藥有無(wú)鎮(zhèn)靜作用及鎮(zhèn)靜強(qiáng)度。上述結(jié)果證實(shí), 慢性應(yīng)激后的大鼠明顯處于焦躁?duì)顟B(tài), 說(shuō)明慢性焦躁應(yīng)激大鼠模型的制備成功, 且通過(guò)量化的標(biāo)準(zhǔn)客觀反映出大鼠的焦l慮程度。
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