細胞傳代培養(yǎng)

操作步驟

1.將長滿細胞的培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。

2、加入0.5- -1ml 0.25%胰酶溶液，使瓶底細胞都浸入溶液中。

3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置鏡下觀察細胞。隨著時間的推移，原貼壁的細胞逐漸趨于圓形，上海細胞實驗，在還未漂起時將胰酶棄去，加入10m培養(yǎng)液終止消化。觀察消化也可以用肉眼，當見到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細zhen孔空隙時終止消化。一般室溫消化時間約為1- -3分鐘。

4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液，細胞實驗外包選哪家，分到另外兩到三瓶中，實踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞，置37°C下繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。

附:消化液配制方法:

稱取0.25克胰酶蛋白酶(活力為1 : 250)， 加入100ml無Ca2 、Mg2 的Hank"s液溶解，濾器過濾chu菌，4°C保存，用前可在379C下回溫。胰酶溶液中也可加入EDTA，使zui終濃度達0.02%。

Q:如何避免中沉淀物的出現(xiàn)？

A:首先要注意正確的解凍步驟，而且溶解過程中一定要每隔一段時間均勻而緩慢的搖動。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在下列情況下沉淀物可能增加，使用中應(yīng)該盡量避免：

（1）熱滅活；

（2）在 37℃ 下培養(yǎng)；

（3）反復(fù)凍融；

（4）γ 射線照射；

（5）長期儲存在 2-8℃；

（6）在室溫下放置時間過長

Q:如何去除中的沉淀？

A:如想去除這些絮狀沉淀物，細胞實驗外包公司，可以將分裝到無菌離心管中，以  400g  離心，上清液即可直接加入到培養(yǎng)基 內(nèi)一起過濾。

注意：不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物，因為這可能阻塞濾膜。

細胞培養(yǎng)中常見的生物污染包括細菌污染、霉菌污染、支原體污染、黑點污染、真菌污染和原生動物污染。這些污染在細胞培養(yǎng)中的特點及相應(yīng)的解決辦法如下：

1.細菌污染

細菌在普通倒置顯微鏡下呈黑色和細砂狀。根據(jù)gan染菌的種類不同，可能會呈現(xiàn)不同的形狀，細胞實驗外包哪家好，培養(yǎng)液一般會變得渾濁、黃色，對細胞生長有明顯影響。

解決方法：仔細檢查器具的滅菌情況，確保通風時間和高壓滅菌器的壓力是否足夠。重要的是，與培養(yǎng)基接觸的移液管等物品如果被污染兩次，則可能會導(dǎo)致儲存溶液也受到污染。所以一定要注意！下次使用前要檢查培養(yǎng)基的渾濁度。此外，建議在培養(yǎng)基中添加抗生su。

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