選擇實(shí)驗(yàn)外包公司需要注意哪些事項(xiàng)？

報(bào)價(jià)

報(bào)價(jià)單一定要有明細(xì)。規(guī)范的外包公司會根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案里的各項(xiàng)內(nèi)容進(jìn)行核算報(bào)價(jià)，材料是多少、人工檢測是多少，可以看到每一筆錢花在哪里，避免籠統(tǒng)的報(bào)價(jià)。另外注意不要一味地追求，做過實(shí)驗(yàn)的都知道實(shí)驗(yàn)成本，外包還需要考慮人工成本。如果價(jià)格過低，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)就難以保證可靠和來源了。當(dāng)然報(bào)價(jià)也不能虛高，做好是能在有限的經(jīng)費(fèi)中盡量保證課題完整性。可以要求公司根據(jù)預(yù)算來調(diào)整優(yōu)化方案，盡可能節(jié)約成本。

Q:如何避免中沉淀物的出現(xiàn)？

A:首先要注意正確的解凍步驟，而且溶解過程中一定要每隔一段時(shí)間均勻而緩慢的搖動。我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在下列情況下沉淀物可能增加，使用中應(yīng)該盡量避免：

（1）熱滅活；

（2）在 37℃ 下培養(yǎng)；

（3）反復(fù)凍融；

（4）γ 射線照射；

（5）長期儲存在 2-8℃；

（6）在室溫下放置時(shí)間過長

Q:如何去除中的沉淀？

A:如想去除這些絮狀沉淀物，可以將分裝到無菌離心管中，以  400g  離心，上清液即可直接加入到培養(yǎng)基 內(nèi)一起過濾。

注意：不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物，因?yàn)檫@可能阻塞濾膜。

二、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染操作步驟

1、操作步驟 [方法一]：

(1) 細(xì)胞培養(yǎng)：取 6 孔培養(yǎng)板 (或用 35 mm 培養(yǎng)皿)，漢中細(xì)胞，向每孔中加入 2 mL 含 1～2×105 個細(xì)胞培養(yǎng)液，37℃ CO2 培養(yǎng)至 40%～60% 匯合時(shí) (匯合過分，轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞)。

(2) 轉(zhuǎn)染液制備：在聚苯乙稀管中制備以下兩液 (為轉(zhuǎn)染每一個孔細(xì)胞所用的量)A 液：用不含培養(yǎng)基稀釋 1-10 μg DNA，終量 100μL，B 液：用不含培養(yǎng)基稀釋 2-50 μgLR，終量 100μL，輕輕混合 A、B 液，室溫中置 10-15 分鐘，細(xì)胞生物學(xué)，稍后會出現(xiàn)微濁現(xiàn)象，但并不妨礙轉(zhuǎn)染 (如出現(xiàn)沉淀可能因 LR 或 DNA 濃度過高所致，應(yīng)酌情減量)。

(3) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備：用 2 mL 不含培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入 1 mL 不含培養(yǎng)液。

(4) 轉(zhuǎn)染：把 A/B 復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中，流式細(xì)胞檢測，搖勻，37℃ 溫箱置 6～24 小時(shí)，吸除無轉(zhuǎn)染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

(5) 其余處理如觀察、篩選、檢測等與其它轉(zhuǎn)染法相同。

注意：轉(zhuǎn)染時(shí)切勿加，對轉(zhuǎn)染效率有很大影響。

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