ELISA 是一種結合抗原、抗ti特異性反應和酶對底物高xiao催化作用的高敏感性免yi學實驗技術。ELISA 的基礎是抗原或抗ti的固相化及抗原或抗ti的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗ti仍保持其免yi學活性，酶標記的抗原或抗ti既保留其免yi學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本(測定其中的抗ti或抗原)與固相載體表面的抗原或抗ti起反應，pcr，洗滌使固相載體上形成的抗原抗ti復合物與液體中的其他物質分開，再加入酶標記的抗原或抗ti，通過反應使其結合在固相載體上。此時固相上的酶含量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。

基因組甲l基化水平(Methyl ati on Content)的分析:

1.高l效液相色譜(Hi gh-performanceLi qui dChromatography， HPLC)HPLC是- -種比較傳統(tǒng)的方法，是根據DNA或蛋白分子量和構象的不同而使其加以分離。由于在動態(tài)相和靜態(tài)相下分子的光吸收度并不相同而加以定量。隨著系統(tǒng)的壓強的增加，其分辨率增l高。故而能夠定量測定基因組整體水平DNA甲l基化水平。該方法由Ruo等1980年首l次報道。過程是將DNA樣品先經鹽酸或氫l氟酸水解成堿基，水解產物通過色譜柱，pcr引物設計，結果與標準品比較，用紫外光測定吸收峰值及其量，計算5 mC/(5mC 5C)的積分面積就得到基因組整體的甲l基化水平。這是一種檢測DNA甲l基化水平的標準方法。

2.高l效毛細管電泳法(Hi gh-per formance Capillary Electrophoresis， HPCE)這是一-種利用窄孔熔融石英毛細管來從復合物中分離不同化學組分的技術。其基礎是在強電場下不同分子的由于其所帶電荷，PCR實驗室，大小，結構以及疏水性等不同而相互分開。用HIPCE方法處理DNA水解產物來確定5mC水平，簡便，經濟且敏感性高。

  全轉錄組測序    

全轉錄組是指特定組織或細胞在特定狀態(tài)下所有轉錄產物的總和，包括mRNA和各種noncoding RNA。我們知道生物體本身的轉錄過程是一個動態(tài)變化且十分復雜的分子作用網絡，如果只是對某個單一RNA分子的研究，有時并不能準確的發(fā)現(xiàn)分子作用機制。而競爭性內源RNA(ceRNA)理論闡述了一種全新的轉錄調控模式：ceRNA（包括lncRNA、circRNA、mRNA、假基因等）分子能夠通過miRNA應答元件（microRNA Respe Element， MRE）競爭性地結合相同的miRNA來調節(jié)彼此的表達水平。舉個例子：miRNA會導致基因沉默現(xiàn)象發(fā)生，而如果lncRNA競爭性結合了miRNA，熒光定量pcr，從而影響了miRNA基因沉默功能實現(xiàn)。

      ceRNA是目前轉錄調控領域的熱點內容之一，通過全轉錄組研究能夠系統(tǒng)性的闡述ceRNA的分子作用機制。目前對全轉錄組簡便的方法就是構建2個測序文庫分別進行測序。標準的生物信息學分析能夠得到mRNA、lncRNA、circRNA、miRNA各自的研究內容，靶向調控網絡、ceRNA網絡、共表達網絡分析可以將這幾種RNA聯(lián)合起來分析，從而發(fā)現(xiàn)新的調控網絡模型。去除rRNA的鏈特異性文庫，含有的RNA信息含量十分豐富，通過測序和生物信息學分析能夠得到mRNA、lncRNA、circRNA的鑒定及注釋信息。不過該文庫構建時會進行片段化選擇從而濾掉了small RNA的信息，所以需要另外再構建一個small RNA文庫，進行測序分析后可以得到miRNA和其他small RNA的鑒定及注釋信息。全轉錄組測序方案路線圖如下所示：

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