武漢默沙克生物????科技有限公司是一家專門從事生物制劑研發(fā)與生產(chǎn)的企業(yè)。目前可提供各種抗1體、免疫學(xué)試劑盒、生化試劑、ELISA試劑盒、分子生物學(xué)試劑等多用途多屬種的高品質(zhì)產(chǎn)品，服務(wù)涉及分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生命科學(xué)領(lǐng)域

7.為什么有的試劑盒是采用競爭ELISA法？

小分子抗原或半抗原因?yàn)槿狈勺鲓A心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn)，因此不能用雙抗1體夾心法進(jìn)行測定，可以采用競爭法。其原理是標(biāo)本中的抗原和固相載體上的抗原競爭生物素化抗1體上的結(jié)合位點(diǎn)，標(biāo)本中抗原量含量愈多，結(jié)合在固相上的生物素化抗1體愈少，后的顯色也愈淺，即顯色深淺與樣本中的抗原濃度成反比。小分子激1素等ELISA測定多用此法。

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IgG可被木瓜蛋白酶分解為三個(gè)區(qū)段，其中兩個(gè)相同的區(qū)段稱抗原結(jié)合片段（Fab）。每個(gè)Fab都保存結(jié)合抗原的能力，但只有一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，是單價(jià)的，與抗原結(jié)合后不出現(xiàn)凝集或沉淀。另一區(qū)段稱Fc段，無抗1體活性，但具有IgG特有的抗原性。

IgG可被胃蛋白酶分解為兩個(gè)片段，一個(gè)Fab雙體，稱F（ab"）2，能和兩個(gè)相同的抗原結(jié)合；另一片段類似Fc，隨后被分解成小分子多肽，無生物活性。

IgM是由五個(gè)單體組成的五聚體，elisa檢測試劑盒，含 10個(gè)重鏈和10個(gè)輕鏈，具有10個(gè)抗原結(jié)合價(jià)，由于空間位置的影響，只表現(xiàn)為五個(gè)抗原結(jié)合價(jià)。IgM分子量約為900000，IgG分子量約為150000。

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3、  細(xì)胞培養(yǎng)上清

取細(xì)胞培養(yǎng)上清到離心管，1000×g離心20min，除去細(xì)胞碎片及雜質(zhì)，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。

4、  細(xì)胞裂解液

1）  吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基，用胰酶消化細(xì)胞，加適量培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細(xì)胞可省略。

2）  收集細(xì)胞懸液，1000×g離心10min，棄去培養(yǎng)基，用預(yù)冷的PBS潤洗3次。

3）  加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液（臨用前加入蛋白酶抑1制劑）重懸細(xì)胞。通常6孔板一個(gè)孔的細(xì)胞量需要150~250μL PBS重懸。

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