武漢默沙克生物????科技有限公司是一家專門從事生物制劑研發(fā)與生產(chǎn)的企業(yè)。目前可提供各種抗1體、免疫學(xué)試劑盒、生化試劑、ELISA試劑盒、分子生物學(xué)試劑等多用途多屬種的高品質(zhì)產(chǎn)品，服務(wù)涉及分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生命科學(xué)領(lǐng)域。

ELISA試劑盒操作步驟

1. 加樣：標(biāo)準(zhǔn)品設(shè)定5個(gè)濃度點(diǎn)10個(gè)孔，每個(gè)濃度設(shè)定平行孔，酶聯(lián)免疫試劑盒廠家，加入50微升不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，空白孔設(shè)定1個(gè)孔加入50微升蒸餾水（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔，在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

2. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

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1．取材

切取的組織塊不宜太大，以利于固定劑穿透，通常以6mm×6mm×5mm為宜。

注意事項(xiàng)：

（1）取材動(dòng)作要迅速，不宜作太久的拖延以免組織細(xì)胞的成分、結(jié)構(gòu)等發(fā)生變化。

（2）切片材料應(yīng)根據(jù)需要觀察的部位進(jìn)行選，盡可能不要損傷所需要的部分。

2．固定

將切好的組織用生理鹽水組織洗3次，立即投入10%中性1福爾1馬林固定液或4%多聚甲醛中固定，固定36小時(shí)。

注意事項(xiàng)：

（1）一般固定液，都以新配為好，配好后應(yīng)貯存在陰涼處，不宜放在日光下，以免引起化學(xué)變化，失去固定作用。

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1、染色過(guò)強(qiáng) 原因 解決辦法 抗1體的濃度過(guò)高或抗1體孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng) 降低抗1體滴度（一般指濃縮性抗1體）抗1體孵育時(shí)間：室溫1 小時(shí)或4℃過(guò)夜 孵育溫度過(guò)高，孵育溫度超過(guò)37℃ 一般室溫20-28℃ DAB 顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或 DAB 濃度過(guò)高 顯色時(shí)間不能超過(guò)5-10分鐘，以顯微鏡下觀察為準(zhǔn) 2、非特異性背景染色 原因 解決辦法 操作過(guò)程中沖洗不充分 每步?jīng)_洗3×5 組織中含過(guò)氧化物酶未阻斷 可再配置新鮮3%H2O2封閉，孵育時(shí)間延長(zhǎng) 組織中含內(nèi)源性生物素 正常非免疫動(dòng)物血1清再封閉 血1清蛋白封閉不充分 延長(zhǎng)血1清蛋白封閉時(shí)間

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