在組織細(xì)胞的體外培養(yǎng)和原代細(xì)胞培養(yǎng)中的組織細(xì)胞分散（將組織塊制備成單個(gè)細(xì)胞懸液）以及傳代細(xì)胞培養(yǎng)中，貼壁生長細(xì)胞的消化分散均要使用組織細(xì)胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶 (Trypsin) ，EDTA 等。胰蛋白酶是一種絲氨酸水解酶，它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切段，水解細(xì)胞間的蛋白質(zhì)，破壞細(xì)胞間的連接，從而使組織或貼壁細(xì)胞離散成單個(gè)細(xì)胞。胰酶分散細(xì)胞的活性與組織或細(xì)胞的特性、胰酶濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān)，在PH 8.0和37℃時(shí)，胰酶的作用能力**強(qiáng)，因此使用胰酶時(shí)，應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間，以免消化過度造成細(xì)胞損傷。一般常用胰酶的工作濃度為0.25%，而半貼壁細(xì)胞或?qū)σ让该舾械募?xì)胞常采用低濃度（0.05%）的胰酶進(jìn)行細(xì)胞消化。由于EDTA能夠螯合Ca2+和Mg2+，從而破壞細(xì)胞連接促進(jìn)細(xì)胞的解離，因此在胰酶溶液中常常會(huì)加入一定量的EDTA混合使用，以增強(qiáng)解離效果。如果消化液中含有胰酶和EDTA，好去除。寧夏胰酶哪個(gè)好

細(xì)胞傳代消化時(shí)所用胰酶的濃度越高是越好 貼壁細(xì)胞的消化：  常用的消化方法主要有酶消化法、離子螯合劑、物理法和冷凍法。其中**常用的是酶消化法。酶消化法：貼壁干細(xì)胞酶消化傳代時(shí)通常采用兩種方式：1、加入胰酶等干細(xì)胞脫落后，再加培養(yǎng)基中止胰酶作用，離心傳代；2、加入胰酶后，鏡下觀察待干細(xì)胞開始脫落時(shí)，棄去胰酶，加入培養(yǎng)液并分瓶。但前者太麻煩，而后者有可能對(duì)干細(xì)胞施加胰酶選擇，因?yàn)榭偸琴N壁不牢的干細(xì)胞先脫落。河北進(jìn)口胰酶價(jià)格信息胰酶細(xì)胞消化液具有方便快速的特點(diǎn)。

    一、EDTA-胰蛋白酶的配制實(shí)驗(yàn)簡介：EDTA-胰蛋白酶的配制實(shí)驗(yàn)所需的EDTA是乙二胺四乙酸，一種金屬螯合劑。它通常與胰蛋白酶結(jié)合使用。原因是鈣和鎂等金屬離子會(huì)降低胰酶的活性，因此在使用胰蛋白酶消化液時(shí)應(yīng)添加EDTA。它可以螯合這些離子并消除胰酶的**作用。二、EDTA-胰蛋白酶的配制實(shí)驗(yàn)所需材料及試劑：PBS,氫氧化鈉,EDTA,三、EDTA-胰蛋白酶的配制實(shí)驗(yàn)步驟：1.磷酸酶的質(zhì)量/體積比為％，即將。注意，盡量不要用水溶解，因?yàn)楸仨毐３譂B透壓。％％，可根據(jù)細(xì)胞消化的難度進(jìn)行調(diào)整。不需要EDTA，可以省略易于消化的細(xì)胞。EDTA對(duì)細(xì)胞粘附有影響，因此應(yīng)大量使用。如果影響粘附，則必須將其用于消化，在用完全培養(yǎng)基終止消化后，離心并棄去上清液，然后添加完全培養(yǎng)基以進(jìn)行培養(yǎng)以除去EDTA。如果不影響附著力，則不要離心。。用磷酸酶稀釋PBS。4.請(qǐng)注意，血清可以阻止血漿酶的作用，但不能阻止EDTA。對(duì)于某些細(xì)胞，有必要在消化后停止離心。5.當(dāng)pH約為8時(shí)，磷酸酶和EDTA**易溶解。在制備過程中，您可以先滴幾滴氫氧化鈉以將pH調(diào)整為8。請(qǐng)注意，磷酸酶會(huì)使溶液變酸，因此您應(yīng)隨時(shí)溶解時(shí)測量pH值。調(diào)整。請(qǐng)注意，不應(yīng)添加過量的氫氧化鈉，否則電池將無法承受堿的作用。

對(duì)一般細(xì)胞0.25%胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100mlPBS,0.25g胰酶步驟：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸餾水)2稱胰酶0.25g3加入PBS中，低速攪拌〈4h冰浴中,或者4℃過夜低速攪拌0.5h冰浴中4調(diào)PH7.45仍在冰浴中6過濾，分裝，-20℃保存，4℃短期內(nèi)用完tip:低速很重要，機(jī)械攪拌對(duì)酶是一種沖擊，如果起沫，酶就變性了。低溫，防止酶失活對(duì)難消化的細(xì)胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因?yàn)镋DTA可以絡(luò)合Ca2，增加消化效力消化液經(jīng)過過濾除菌，可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化，或者一些組織的消化。

    胰酶使用注意：1、在使用胰酶細(xì)胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。2、胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時(shí)間不宜過長，否則細(xì)胞鋪板后生長狀況會(huì)較差。胰酶配制方法：1、培養(yǎng)液配制，方便好用，對(duì)細(xì)胞影響小，并且培養(yǎng)液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解2、生理鹽水配制，要先調(diào)ph值（①胰酶（1：250）②③④⑤⑥⑦Water1000mL磁力攪拌2-3小時(shí)，調(diào)，過濾除菌。）3、pbs（：稱取胰酶粉末，先用少許滅菌過的PBS調(diào)成糊狀，然后補(bǔ)足到100ml。置室溫?cái)嚢?小時(shí)或冰箱內(nèi)過夜，過濾滅菌，分裝，4℃保存?zhèn)溆?。?或是hanks或是D-hanks液配制（1.稱取胰蛋白酶粉末置燒杯中，先用少許D-Hanks平衡鹽溶液（）調(diào)成糊狀，然后再補(bǔ)足D-Hanks平衡鹽溶液，攪拌混勻，置室溫4小時(shí)或冰箱過夜，并不斷攪拌振蕩；2.次日，先用濾紙粗濾，再進(jìn)行過濾除菌，分裝入瓶中，低溫冰箱保存?zhèn)溆?，常用濃度為。胰蛋白酶溶液偏酸，使用前可調(diào)用碳酸氫鈉溶液調(diào)pH至。）一般，至于作用效果，需要消化一次細(xì)胞感覺一下，因?yàn)椴煌瑥S家的酶不一樣，有的作用溫和，有的作用劇烈。4、是否需要四度放置過夜，取決于你的胰酶的純度。過去的胰酶純度不高，所以難以溶解，需要四度過夜.而現(xiàn)在的胰酶純度都很高。 變色的胰酶同樣能很好的用于細(xì)胞的解離，請(qǐng)放心使用。寧夏胰酶哪個(gè)好

胰酶在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用和在消化酶中的作用？寧夏胰酶哪個(gè)好

胰酶消化細(xì)胞的原理胰酶消化細(xì)胞是一種用來分解細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞間物質(zhì)的化學(xué)過程它可以被看成一種簡單的動(dòng)力學(xué)過程，它將細(xì)胞結(jié)合部分的物質(zhì)分解為其他物質(zhì)，然后這些留下的物質(zhì)可以用來維持細(xì)胞的高能量水平這種過程通過將脂肪、蛋白質(zhì)、糖類和其它物質(zhì)分解為小的離子或者原子小分子的方式來發(fā)生。胰酶是細(xì)胞分解與吸收物質(zhì)的一種關(guān)鍵分子，通常有四種類型，它們是肽酶，脂水解酶，載脂蛋白酶和糖水解酶，分別可以將蛋白質(zhì)、脂肪、脂蛋白和糖類物質(zhì)分解為更小的離子和分子，以便細(xì)胞可以更好地吸收物質(zhì)，維持其自身的正常功能和形態(tài)。寧夏胰酶哪個(gè)好