適用場景

1、高靈敏度地檢測蛋白-蛋白的交互作用；

2、尋找在蛋白-蛋白交互作用中起關(guān)鍵作用的結(jié)構(gòu)域或活性位點；

3、尋找與靶蛋白相互作用的新蛋白；

4、尋找具有藥1物治1療作用的小分子多肽；

5、尋找調(diào)控蛋白質(zhì)相互作用的化合物；

6、繪制蛋白質(zhì)相互作用圖譜。

酵母雙雜交技術(shù)的優(yōu)點

1、無需純化蛋白；

2、檢測在活1細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行，可以在一定程度上代表體內(nèi)的真實情況；

3、檢測的結(jié)果是基因表達(dá)產(chǎn)物的積累效應(yīng)，因而可檢測存在于蛋白質(zhì)之間的微弱的或暫時的相互作用；

4、酵母雙雜交系統(tǒng)可采用不同組織、器1官、細(xì)胞類型和分化時期材料構(gòu)建cDNA文庫，并能分析細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核等多種亞細(xì)胞部位的蛋白。

原位雜交第三天

1） 用1ml含10%熱滅清的MABT溶液置換溶液，放置搖床上25分鐘，然后用1mlMABT置換，25分鐘，再用1mlMABT溶液置換，一小時以上，后用1mlMABT溶液置換，25分鐘。

2） 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，植物染色體原位雜交技術(shù)服務(wù)，每次放置五分鐘。

3）將胚胎轉(zhuǎn)入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate（底物，用之前加5mM左旋米唑），十六孔板外面包上錫箔紙以避光，避免搖動，室溫下顯色。

4）每隔一小時觀察胚胎是否開始顯色

5）將顯色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗兩三次后加上4%多聚甲醛固定，拍照。

6）4C冰箱保存。

原位雜交天

1. 重新水化和固定

1） 吸取固定好的胚胎，加入50%的PBST溶液，放置5分鐘。

2） 置換成30%的PBST溶液，放置5分鐘

3） 置換成PBST溶液，放置5分鐘，重復(fù)一次

4） 置換成4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘5） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。

蛋白酶處理與后固定（本實驗不做此步）

1） 用10ul/ml的蛋白酶K在室溫下處理胚胎。5體節(jié)以下的胚胎不處理，5體節(jié)到24小時的胚胎處理3分鐘，24小時以上的胚胎處理5分鐘或者更長。發(fā)育時間越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶處理，發(fā)育時間長的胚胎就需要用蛋白酶來疏松組織，以便于雜交。

2） 用PBST溶液輕洗，在PBST中放置5分鐘。

3） 用4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘，室溫。

4） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。

2. 預(yù)雜交

1）每個管中置換成大約300ulHYB－溶液，60℃水浴5分鐘，避免振蕩。

2）用等體積的HYB 取代HYB－。

3）60℃水浴，預(yù)雜交4小時以上。

3. 雜交

1）吸去預(yù)雜交的HYB ，加上100ul已加入探針的HYB 溶液（探針濃度約為1ng/ul）..

2）60℃ 溫浴過夜。注：雜交與預(yù)雜交的溫度可以是55到60度不等，溫度越低，探針結(jié)合越好，溫度越高，背景越小。

植物染色體原位雜交技術(shù)服務(wù)-科銳諾生物(在線咨詢)由武漢科銳諾生物科技有限公司提供?！巴饷隗w,透射電鏡,掃描電鏡,石蠟切片等技術(shù)服務(wù)”選擇武漢科銳諾生物科技有限公司，公司位于：湖北省武漢市江夏區(qū)神墩四路666號武漢國英種子A棟1樓，多年來，科銳諾堅持為客戶提供好的服務(wù)，聯(lián)系人：王經(jīng)理。歡迎廣大新老客戶來電，來函，親臨指導(dǎo)，洽談業(yè)務(wù)?？其J諾期待成為您的長期合作伙伴！