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可通過在細(xì)胞培養(yǎng)基中添加一些保護(hù)劑,降低細(xì)胞-氣體和細(xì)胞-液體的表面張力,減少氣泡的形成。4.細(xì)胞培養(yǎng)基的**及儲(chǔ)存**方式及注意事項(xiàng)細(xì)胞培養(yǎng)基**的方式分為高壓**和膜過濾**,不同的培養(yǎng)基由于其營養(yǎng)成份不同,**方式也可能不同。①高壓**某些培養(yǎng)基(如MEM)可進(jìn)行高壓**,這類培養(yǎng)基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉,一般是在培養(yǎng)基高壓**后才加入。另外可用耐高壓的谷氨酸鹽(如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)代替L-谷氨酰胺。可高壓**的培養(yǎng)基在121℃、15psi,15分鐘的條件下完全可達(dá)到**效果及營養(yǎng)成分的**小損失,不需將**時(shí)間延長。絕大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)基不適宜高壓**。因培養(yǎng)液中常含有維生素、蛋白質(zhì)、多肽、生長因子等物質(zhì),這些物質(zhì)在高溫或射線照射下易發(fā)生變性或失去功能,因而上述液體多采用過濾消毒以除去**。可供過濾**使用的濾膜很多,其材料多為polyethersulphone(PES)、尼龍、多聚碳酸鹽、醋酸纖維素、硝酸纖維素、PTFE、陶瓷等。膜過濾**是當(dāng)前較為常用及便捷的一種方法,常采用μm孔徑的濾膜,部份采用μm孔徑。與高壓過濾方式相比,濾膜具有使用期限且價(jià)格較高,但對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成份破壞性較小。通常液體細(xì)胞培養(yǎng)基避免-20℃凍存。MEM培養(yǎng)基常用于多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng)。福建無血清培養(yǎng)基進(jìn)口
c、結(jié)果為:在用未調(diào)ph液體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)時(shí),整體長勢(shì)從優(yōu)至弱分別為1/2cs未調(diào)ph液體培養(yǎng)基、cs未調(diào)ph液體培養(yǎng)基、1/2ms未調(diào)ph液體培養(yǎng)基、ms未調(diào)ph液體培養(yǎng)基;在用ph調(diào)至,整體長勢(shì)從優(yōu)至弱分別為1/、、1/、;不論是否調(diào)ph至,cs液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的馬鈴薯幼苗長勢(shì)均優(yōu)于ms液體培養(yǎng)基;不論是否調(diào)ph至,1/2cs液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的馬鈴薯幼苗長勢(shì)均優(yōu)于1/2ms液體培養(yǎng)基。如圖9和圖10所示。說明,1/2cs液體培養(yǎng)基和cs液體培養(yǎng)基應(yīng)用于植物水培時(shí),不論是否調(diào)節(jié)ph至,均能獲得很好的培養(yǎng)效果,克服了傳統(tǒng)液體培養(yǎng)基必須調(diào)節(jié)ph后才適用于植物水培的缺點(diǎn)。**后說明的是,以上實(shí)施例*用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制,盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明,本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解,可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換,而其不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的宗旨和范圍,則均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當(dāng)中。中國澳門RPMI1640培養(yǎng)基技術(shù)指導(dǎo)MEM培養(yǎng)基在細(xì)胞生物學(xué)研究中的基礎(chǔ)培養(yǎng)基之一。
但其引入的尿素和**銨成分含量過高,這對(duì)多種植物生長不利;cna一種植物**培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基及cna一種無nh4no3植物**培養(yǎng)用培養(yǎng)基分別公開了一種無硝酸培養(yǎng)基,獲得較好的培養(yǎng)效果,但新引入的硝酸鈣和硝酸鎂兩種成分均為易制爆試劑;cna一種植物組培**培養(yǎng)基公開了一種無硝酸銨培養(yǎng)基,可提高植物組培成功率,但引入了易制爆試劑硝酸鈉,且其*適用于植物離體培養(yǎng),不具有通用性。此外,現(xiàn)有的植物**培養(yǎng)基,包括ms、b5、n6以及其他公開的植物**培養(yǎng)基,它們被用于配制液體培養(yǎng)基時(shí)的ph值波動(dòng)大,在用于植物水培時(shí)均需要調(diào)節(jié)ph,過程繁瑣,耗費(fèi)時(shí)間。因此,急需一種既無硝酸銨、也不引入新的易制爆成分,并且培養(yǎng)效果與ms培養(yǎng)基相當(dāng)或優(yōu)于ms培養(yǎng)基的***適用于多種植物**培養(yǎng)的ph穩(wěn)定型培養(yǎng)基。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:有鑒于此,本發(fā)明的目的是提供一種在不額外引入易制爆成分的前提下,去除了市場(chǎng)禁止流通的易制爆成分nh4no3,且ph穩(wěn)定的***適用于多種植物**培養(yǎng)的植物基本培養(yǎng)基,以解決現(xiàn)有植物**培養(yǎng)基存在的技術(shù)問題。本發(fā)明廣適性植物**培養(yǎng)基,其每1000ml培養(yǎng)基中含有:kno32662mg、。
**早開發(fā)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基(minimalessentialmedium,MEM),其本質(zhì)為含有鹽、氨基酸、維生素和其他必需營養(yǎng)物的pH緩沖的等滲混合物。在此基礎(chǔ)上,DMEM、IMDM、HAMF12、PRMI1640等各種合成細(xì)胞培養(yǎng)基被不斷開發(fā)出來。常用合成培養(yǎng)基的配方此處不詳細(xì)介紹,其特性及應(yīng)用的范圍見表1-2。表1-2常用合成培養(yǎng)基的特性及應(yīng)用的范圍培養(yǎng)基名稱特性及應(yīng)用范圍199細(xì)胞培養(yǎng)基添加適量的血清后,可***用于多種細(xì)胞培養(yǎng),并用于**學(xué)、*苗生產(chǎn)等。MEM細(xì)胞培養(yǎng)基MEM(MinimalEssentialMedium)培養(yǎng)基有含Earle's平衡鹽的類型,也有含Hanks'平衡鹽的類型;有高壓**型的,也有過濾**型的;還有含非必需氨基酸的類型。是**基本、適用范圍**廣的細(xì)胞培養(yǎng)基。DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基DMEM(Dulbecco’smodifiedMinimalEssentialMedium)是由Dulbecco在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上改良獲得的,各成分份量加倍,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)兩種類型。細(xì)胞生長快。附著稍差的腫*細(xì)胞、克隆培養(yǎng)用高糖效果較好,常用于雜交*的骨髓*細(xì)胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)。IMDM細(xì)胞培養(yǎng)基IMDM(Iscove’smodifiedDMEM)是由Iscove在DMEM基礎(chǔ)上改良,增加了幾種氨基酸和胱氨酸量等??捎糜陔s交*細(xì)胞培養(yǎng)。無酚紅培養(yǎng)基適用于對(duì)酚紅敏感的實(shí)驗(yàn)。
本發(fā)明涉及植物**培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域,尤其是涉及一種繡球的液體培養(yǎng)基組培快繁方法。背景技術(shù):繡球(hydrangeamacrophylla)為虎耳草科繡球?qū)俾淙~灌木,別名八仙花、**花、粉團(tuán)花、雪球花、草繡球等,是園林上應(yīng)用***的觀賞植物。原產(chǎn)于我國長江流域及以南,自然株高2m。葉對(duì)生,倒卵或橢圓形,邊緣有鋸齒,傘房花序頂生,直徑20cm,近球形。花色多變,青白色,漸轉(zhuǎn)粉紅色,再轉(zhuǎn)紫紅色,花色美艷。其花色又常隨土壤的酸堿度而改變,土壤ph值4~6時(shí),花色多呈藍(lán)色;ph值,則呈紅色。繡球花葉片翠綠,花色鮮艷,盛開時(shí)花團(tuán)錦簇,美麗多姿,每簇花可開2個(gè)月之久,觀賞期長。由于繡球花的孕性花極為少數(shù),所以不易結(jié)種,常用分株、壓條或扦插方法繁殖,但分株、壓條繁殖倍率低,速度慢,而扦插繁殖又會(huì)受到季節(jié)的限制,不能常年生產(chǎn)苗木,很難滿足市場(chǎng)的需求。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的不足,本發(fā)明的目的之一是提供一種繁殖周期短,效率高,成本低的繡球的液體培養(yǎng)基組培快繁方法。本發(fā)明的上述發(fā)明目的是通過以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的:一種繡球的液體培養(yǎng)基組培快繁方法,具體步驟如下:s1:外植體選擇;s2:外植體消毒;s3:誘導(dǎo)培養(yǎng);s4:增殖培養(yǎng);s5:生根培養(yǎng),其中。F12培養(yǎng)基提供了豐富的營養(yǎng),支持細(xì)胞增殖。福建無血清培養(yǎng)基進(jìn)口
RPMI1640培養(yǎng)基能夠提高細(xì)胞的存活率。福建無血清培養(yǎng)基進(jìn)口
愈傷**誘導(dǎo)率為100%。如圖6所示。對(duì)比培養(yǎng)例6:將cs基本培養(yǎng)基替換為ms基本培養(yǎng)基,其余完全同培養(yǎng)實(shí)例6,ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)結(jié)果為:本氏***葉片愈傷**誘導(dǎo)時(shí),培養(yǎng)15-18d的葉片略微增厚,在葉片四周產(chǎn)生較少的淡綠色愈傷**,愈傷**誘導(dǎo)率為90%,在愈傷**團(tuán)塊上產(chǎn)生的嫩綠色不定芽數(shù)量較少;本氏***根愈傷**誘導(dǎo)時(shí),培養(yǎng)9-11d在切口處產(chǎn)生大量淡黃色致密的愈傷**,愈傷**誘導(dǎo)率為100%。如圖6所示。培養(yǎng)實(shí)例6和對(duì)比培養(yǎng)例6的誘導(dǎo)結(jié)果比較:用上述方法進(jìn)行本氏***葉片愈傷**誘導(dǎo)時(shí),cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基愈傷**誘導(dǎo)率為100%,而ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)率*為90%,在所述相同培養(yǎng)條件下,與ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基相比,cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基可更快誘導(dǎo)出大量致密的葉片愈傷**、產(chǎn)生更多的不定芽;用上述方法進(jìn)行本氏***根愈傷**誘導(dǎo)時(shí),cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基與ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基誘導(dǎo)出的根愈傷**形態(tài)相近,兩種培養(yǎng)基的根愈傷**誘導(dǎo)率均為100%。如圖6所示。培養(yǎng)實(shí)例7:水稻成熟胚愈傷**誘導(dǎo)(1)水稻種子消毒及篩選:a、選種:以秈稻縉恢10號(hào)為例,將水稻種子晾曬干燥后于4℃下長期保存,挑選籽粒飽滿、大小基本一致的水稻種子,用剪刀從種子中部剪開,去除谷殼。福建無血清培養(yǎng)基進(jìn)口
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