1、胰酶是，就是說PBS,注意，盡量不要用水來溶，因為要保持滲透壓。2、EDTA的工作液溶度是－，根據(jù)細胞消化的難易程度自己調(diào)整。EDTA并不是必須的，容易消化的細胞可不加。EDTA對細胞貼壁性有影響，因此使用時要甚重。如果影響貼壁，但消化時必須要用，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后，可離心棄上清，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，可去除EDTA。如果對貼壁沒影響，那么可不離心。3、EDTA的濃度也是質(zhì)量體積比。和胰酶一起溶于PBS。4、注意，血清可終止胰酶的作用，但不能終止EDTA的作用，對有些細胞來說，終止消化后的離心是必要的。5、胰酶和EDTA在pH為8左右的時候**易溶解，在配制時可先滴幾滴NaOH將pH調(diào)至8，注意，胰酶可使溶液變酸，所以要邊溶邊測pH，隨時調(diào)整。注意，不可加過量NaOH，否則過堿，細胞會受不了。6、胰酶EDTA相對比較難溶，可用磁力攪拌器，或放入4度冰箱過夜，待溶解后過濾**。7、可配2－3乘的胰酶，這樣比較節(jié)約時間和濾器，用的時候?qū)ι?*PBS即可。8、儲存液放在－20度冰箱凍存，使用液放在4度，用的時候不要放在27度水浴鍋溫浴，因為這樣會讓胰酶很快失效，使用前放在室溫下一會。胰酶是一種復合消化酶制劑。胰酶常見問題

胰酶分裝凍存時要注意什么？胰酶分裝時盡量分裝成多瓶，并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則。因為冷凍保存時體積會膨脹，多次使用同一瓶胰酶反復凍融會降低消化效果并增大污染的可能性。5、怎么才能判斷胰酶消化完全？注意：不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才表示消化好了。一般肉眼觀察貼壁細胞層，只要能移動了，多半呈沙狀移動就可以了，就應該停止消化。6、胰酶適用于哪些細胞消化？它的消化效果與哪些有關(guān)呢？胰酶適用于消化細胞間質(zhì)較少的軟組織和傳代細胞，如胚胎、上皮、肝、腎等組織，但對纖維性組織和較硬的*組織效果較差。胰酶的消化效果主要與pH值、溫度、胰酶濃度、組織塊大小和硬度有關(guān)。浙江進口胰酶常用知識胰酶濃度：常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作為消化液。

    在253nm的波長處測定吸光度，必要時可用上述底物原液或磷酸鹽緩沖液調(diào)節(jié)，使吸光度在～，作為底物溶液。制成后應在2小時內(nèi)使用。供試品溶液的制備精密稱取本品適量，加～60胰蛋白酶單位的溶液。測定法取底物溶液，加μl，混勻，作為空白。另取供試品溶液200μl，加底物溶液（恒溫于℃±℃），立即計時，混勻，使比色池內(nèi)的溫度保持在25℃±℃，照紫外－可見分光光度法（2010年版*典二部附錄ⅣA），在253nm的波長處，每隔30秒鐘讀取吸光度，共5分鐘。以吸光度為縱坐標，時間為橫坐標，作圖；每30秒鐘吸光度的改變應恒定在～，呈線性關(guān)系的時間不得少于3分鐘。若不符合上述要求，應調(diào)整供試品溶液的濃度，再作測定。在上述吸光度對時間的關(guān)系圖中，取成直線部分的吸光度，按下式計算：式中P為每1mg供試品中含胰蛋白酶的量，單位；A1為直線上終止的吸光度；A2為直線上開始的吸光度；T為A1至A2讀數(shù)的時間，分；W為測定液中含供試品的量，mg；，吸光度每分鐘改變，即相當于1個胰蛋白酶單位。胰蛋白酶制劑注射用胰蛋白酶[3]胰蛋白酶胰蛋白酶的醫(yī)學檢查胰蛋白酶檢查名稱胰蛋白酶胰蛋白酶分類血液生化檢查>酶類測定胰蛋白酶胰蛋白酶的測定原理同酶速率法測定。

    但分子構(gòu)型有很大區(qū)別。沉降系數(shù)S20W為，pI=，熱穩(wěn)定性較牛胰蛋白酶穩(wěn)定，Ca2+對酶的保護作用不及牛羊的明顯，無螯合Ca2+的中心部位。有6對二硫鍵，斷裂1~2個鍵，均不至于破壞酶分子的完整結(jié)構(gòu)而保護了酶的活性。酶的活力分別相當于牛的72%及羊的61%。羊胰蛋白酶與牛、豬的相似，但其活力略高于牛和豬的。胰蛋白酶專一作用有堿性氨基酸精氨酸及賴氨酸羧基所組成的肽鍵。酶本身很容易自溶，由原先的β-胰蛋白酶酶轉(zhuǎn)化為α-胰蛋白酶，再進一步降解為擬胰蛋白酶，乃至碎片，活力也逐步下降而喪失。除存在于脊椎動物外，還存在于蠶、海盤車、蝲姑、放線菌等范圍***的生物體中。另外與高等動物的血液凝固和癥等有關(guān)的凝血酶、纖溶酶、舒血管素等蛋白酶在化學結(jié)構(gòu)和特異性等方面與胰蛋白酶具有密切的關(guān)系，可以認為這些酶是從共同的祖先酶在進化過程中分化而來的。胰糜蛋白酶與彈性蛋白酶在結(jié)構(gòu)和催化機制方面也具有密切關(guān)系，但其特異性則完全不同。胰蛋白酶系自牛、羊或豬胰中提取的一種蛋白水解酶。***品標準規(guī)定按干燥品計算，每1mg的效價不得少于2500單位。由牛、羊、豬胰臟提取而得的一種肽鏈內(nèi)切酶。在消化酶中，胰酶主要用于促進消化。

    一、EDTA-胰蛋白酶的配制實驗簡介：EDTA-胰蛋白酶的配制實驗所需的EDTA是乙二胺四乙酸，一種金屬螯合劑。它通常與胰蛋白酶結(jié)合使用。原因是鈣和鎂等金屬離子會降低胰酶的活性，因此在使用胰蛋白酶消化液時應添加EDTA。它可以螯合這些離子并消除胰酶的**作用。二、EDTA-胰蛋白酶的配制實驗所需材料及試劑：PBS,氫氧化鈉,EDTA,三、EDTA-胰蛋白酶的配制實驗步驟：1.磷酸酶的質(zhì)量/體積比為％，即將。注意，盡量不要用水溶解，因為必須保持滲透壓。％％，可根據(jù)細胞消化的難度進行調(diào)整。不需要EDTA，可以省略易于消化的細胞。EDTA對細胞粘附有影響，因此應大量使用。如果影響粘附，則必須將其用于消化，在用完全培養(yǎng)基終止消化后，離心并棄去上清液，然后添加完全培養(yǎng)基以進行培養(yǎng)以除去EDTA。如果不影響附著力，則不要離心。。用磷酸酶稀釋PBS。4.請注意，血清可以阻止血漿酶的作用，但不能阻止EDTA。對于某些細胞，有必要在消化后停止離心。5.當pH約為8時，磷酸酶和EDTA**易溶解。在制備過程中，您可以先滴幾滴氫氧化鈉以將pH調(diào)整為8。請注意，磷酸酶會使溶液變酸，因此您應隨時溶解時測量pH值。調(diào)整。請注意，不應添加過量的氫氧化鈉，否則電池將無法承受堿的作用。消化液經(jīng)過過濾除菌，可以直接用于培養(yǎng)細胞的消化，或者一些組織的消化。胰酶常見問題

細胞消化時，如果消化液中只有胰酶，不含EDTA，不去除是沒有問題的。胰酶常見問題

胰蛋白酶是一種肽鏈內(nèi)切酶，屬于絲氨酸蛋白酶家族，不僅可以水解堿性氨基酸（精氨酸或賴氨酸）羧基端的肽鍵，還可以水解由堿性氨基酸的羧基形成的酰胺鍵或酯鍵。胰蛋白酶可以從牛、豬等哺乳動物的胰臟提取，經(jīng)過純化后獲得結(jié)晶，再制成凍干制劑。牛的胰蛋白酶有223個氨基酸，分子量為23800道爾頓，活性部位的絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶。胰蛋白酶溶于水，不溶于乙醇、甘油和三氯甲烷等有機溶劑。胰蛋白酶的等電點pH值為10.1，**適pH值范圍在7.8~8.5左右，pH值大于9.0時不可逆失活。鈣離子對胰蛋白酶的酶活具有保護和***作用。[1]胰酶常見問題