蛋白質(zhì)結(jié)晶涉及四個(gè)重要步驟

1. 蛋白質(zhì)純度的確定。如果不夠非常純，必須要進(jìn)一步純化。

2. 蛋白質(zhì)溶解于合適的溶劑中，從中它能通過(guò)一種鹽或有機(jī)化合物而析出。溶劑通常是水-緩沖劑溶液，有時(shí)加，如2--2，4-（MPD）。正常情況下，沉淀劑也被加入，但是濃度不高于使沉淀產(chǎn)生。對(duì)于不溶于水-緩沖劑或水-的膜蛋白，還需要加入去污劑。

3. 使溶液過(guò)飽和。在這一步中，小聚集體形成，它是晶體生長(zhǎng)所需的核。對(duì)小分子的結(jié)晶來(lái)說(shuō)，相比于蛋白質(zhì)更為人熟知，晶核的自發(fā)形成需要提供表面張力能。一旦這個(gè)能障被突破了，晶體開(kāi)始生長(zhǎng)。能障在高水平的過(guò)飽和度時(shí)很容易克服。因此，在高過(guò)飽和度時(shí)，晶核更易自發(fā)形成。晶核的形成可作為一個(gè)過(guò)飽和度和其他參數(shù)的函數(shù)通過(guò)多種方法來(lái)研究，包括光散射、熒光去極化及電子顯微鏡。

4. 一旦晶核形成，晶體生長(zhǎng)正式開(kāi)始。對(duì)低分子量的化合物而言，新分子會(huì)逐步結(jié)合到正在生長(zhǎng)的晶體表面。這是由于這些位置的結(jié)合能比較大，相對(duì)于分子結(jié)合到平滑的表面。這些步驟要么由晶系缺陷造成，要么發(fā)生在表面隨機(jī)形成的晶核。

蛋白結(jié)晶板概念

不能模擬形狀分布，因?yàn)槟Ｐ椭械木w尺寸被簡(jiǎn)單的定義為該晶體的體積當(dāng)量直徑.本提出了一個(gè)適用于蛋白質(zhì)結(jié)晶過(guò)程的基于晶體形狀結(jié)構(gòu)的群體粒數(shù)衡算模型.在該模型中，蛋白質(zhì)晶體的形狀被定量描述為每個(gè)晶面到晶體幾何中心的距離，由此提出了基于蛋白質(zhì)晶形的多維粒度分布，即形狀分布的概念.以溶菌酶結(jié)晶過(guò)程為例，對(duì)溶菌酶晶體結(jié)晶的熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)行為進(jìn)行了分析和研究，應(yīng)用非線性回歸的方法，確定了四方系溶菌酶的結(jié)晶動(dòng)力學(xué)方程參數(shù).結(jié)合本提出的基于晶體形狀結(jié)構(gòu)的群體粒數(shù)衡算模型，質(zhì)量衡算方程。

蛋白質(zhì)結(jié)晶板

本發(fā)明涉及一種蛋白質(zhì)結(jié)晶板，包括結(jié)晶板主體部分(10)，以及在結(jié)晶板主體上以陣列形式分布的儲(chǔ)槽單元(20)，每一所述儲(chǔ)槽單元(20)具有面板(240)，在所述面板中間位置形成一凹槽，所述凹槽底部為第二面板(250)，在所述第二面板中間位置或靠近一側(cè)的位置凹入形成儲(chǔ)槽(220)，所述儲(chǔ)槽(220)至少一側(cè)的第二面板(250)中形成有至少一個(gè)滴液槽(230)。

這是老的簡(jiǎn)單的結(jié)晶方法，其原理是同步地在蛋白質(zhì)溶液中加入沉淀劑，立即使溶液達(dá)到一個(gè)高過(guò)飽和狀態(tài)。幸運(yùn)的話，不需進(jìn)一步處理即可在過(guò)飽和溶液中逐漸長(zhǎng)出晶體。一個(gè)用于微分批結(jié)晶的自動(dòng)化系統(tǒng)已被Chayen等人設(shè)計(jì)出（1991，48孔座滴板哪家好，1992），其微分批方法中，他們?cè)?-2μl包含蛋白質(zhì)和沉淀劑的液滴中生長(zhǎng)晶體。

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