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蛋白質(zhì)晶體板制作
設(shè)計(jì)并制作了一種在微腔中對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行微批量法(microbatch)結(jié)晶的碟式微流控結(jié)晶芯片,它是一種高通量、低成本、低耗樣量(納升級(jí))、操作簡(jiǎn)便的蛋白質(zhì)結(jié)晶篩選方法,這種芯片能成功地結(jié)晶溶菌酶(lysozyme)和青色熒光蛋白(CyPet).為了系統(tǒng)地比較這種微流控芯片與傳統(tǒng)的使用蒸汽擴(kuò)散法的24孔結(jié)晶板的結(jié)晶能力,用3個(gè)Hampton結(jié)晶試劑盒,在4℃及20℃培養(yǎng)條件下分別對(duì)5種標(biāo)準(zhǔn)蛋白(溶菌酶(lysozyme)、木聚糖酶(xylanase)、脂肪酶B(lipase B)、葡萄糖異構(gòu)酶(glucose isomerase)和嗜熱菌蛋白酶(thermolysin))進(jìn)行了結(jié)晶篩選實(shí)驗(yàn).結(jié)果表明,在4℃時(shí)微流控芯片與24孔結(jié)晶板有相近數(shù)目的結(jié)晶條件(91 vs 98)。
蛋白結(jié)晶板
本實(shí)用新型屬于生物化學(xué)儀器設(shè)備,所提供的一種蛋白質(zhì)晶體生長(zhǎng)用液/液擴(kuò)散法結(jié)晶室,包括結(jié)晶室體和結(jié)晶室座,結(jié)晶室體裝在結(jié)晶室座上.結(jié)晶室體外形呈長(zhǎng)方體,由多塊加工后的石英玻璃或光學(xué)玻璃塊光膠組合而成.結(jié)晶室座上對(duì)著結(jié)晶室體的位置有垂直的測(cè)溫孔和水平的通光槽,河北蛋白質(zhì)結(jié)晶板,二者垂直交叉,便于對(duì)結(jié)晶室中晶體生長(zhǎng)的觀察和測(cè)量.本實(shí)用新型結(jié)晶室具有結(jié)構(gòu)緊湊,成本低,占用空間少的優(yōu)點(diǎn)。
蛋白結(jié)晶板
以蛋白質(zhì)晶體學(xué)為主要手段的結(jié)構(gòu)基因組學(xué)研究通常包括選靶、、表達(dá)、純化、晶體篩選與優(yōu)化、X射線衍射數(shù)據(jù)收集與結(jié)構(gòu)解析等步驟。其中,蛋白質(zhì)結(jié)晶板價(jià)格,獲得滿足衍射數(shù)據(jù)收集要求的高質(zhì)量蛋白晶體是大的"瓶頸"。我們?cè)谌祟?lèi)細(xì)胞內(nèi)氯離子通道蛋白2(CLIC2)結(jié)構(gòu)與功能研究中發(fā)現(xiàn)用5,5"二硫雙-2-甲酸(處理,可以顯著提高CLIC2晶體質(zhì)量,蛋白質(zhì)結(jié)晶板報(bào)價(jià),成功收集了分辨率至2埃的衍射數(shù)據(jù)試劑作為一個(gè)檢測(cè)巰基化合物的經(jīng)典試劑,通常用在半胱氨酸或含量測(cè)定上。在蛋白晶體學(xué)領(lǐng)域里以獲得蛋白晶體為目的的試劑修飾例子實(shí)際并不多。我們將其應(yīng)用在蛋白結(jié)晶學(xué)領(lǐng)域,使用Ellman試劑修飾方法使蛋白晶體質(zhì)量得到有效改善。
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