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發(fā)現(xiàn)病例的要盡快對(duì)病毒進(jìn)行全基因組測(cè)序的原因是:通過(guò)對(duì)病毒全基因組高通量測(cè)序可以在較短時(shí)間內(nèi)獲取病毒的全部基因信息,解釋病毒的來(lái)源、傳播、變異演化等科學(xué)問(wèn)題,為后續(xù)流行病學(xué)調(diào)查指明方向,為相關(guān)病例的追蹤溯源提供重要依據(jù),深圳病毒二代測(cè)序分析公司,目前對(duì)病毒溯源分型主要檢測(cè)手段就是高通量測(cè)序技術(shù)。高通量測(cè)序技術(shù)如何進(jìn)行病毒溯源?先對(duì)獲得的早期病例標(biāo)本開(kāi)展病毒全基因組高通量序列測(cè)定,通過(guò)與本地流行病毒及全球其他地區(qū)測(cè)定過(guò)序列的病毒比較,如果該病例傳染的病毒在基因組上和北美流行株更接近,比如在全長(zhǎng)接近3萬(wàn)個(gè)堿基的序列上,兩者只相差幾個(gè)堿基,深圳病毒二代測(cè)序分析公司,深圳病毒二代測(cè)序分析公司,相似度為99%以上,這就是為我們推斷該病例攜帶病毒為北美流行株提供依據(jù)。通過(guò)對(duì)病毒全基因組高通量測(cè)序可以在較短時(shí)間內(nèi)獲取病毒的全部基因信息,解釋病毒的來(lái)源。深圳病毒二代測(cè)序分析公司
DNA病毒基因組的測(cè)序:動(dòng)物、人、植物被特定病毒株侵染、分離到病毒株、連續(xù)傳代的病毒株往往都需要獲得盡量完整的基因組序列來(lái)指導(dǎo)下一步的研究,傳統(tǒng)的sanger測(cè)序需要了解序列、設(shè)計(jì)引物、做很多PCR,往往效率很低,而NGS作為一種無(wú)需特異性引物擴(kuò)增的測(cè)序方式,可以直接從DNA中獲得序列。DNA病毒基因組測(cè)序:如果,1,您的目的是:獲得一種指定DNA病毒盡量完整的序列;2,您可以提供該病毒的中英文名稱;3,您了解樣本中病毒的載量情況、培養(yǎng)狀況、ct值等任一信息。那么,探普為你準(zhǔn)備了完整的下單、樣本準(zhǔn)備方法,經(jīng)過(guò)探普的實(shí)驗(yàn)、測(cè)序、分析,你將獲得:1,1-5Gb測(cè)序數(shù)據(jù)量rawdata;2,一般可獲得95%以上的拼接序列,100kb以上大基因組病毒除外;其他特殊要求如:突變分析、進(jìn)化分析都可直接與技術(shù)支持聯(lián)系。深圳病毒二代測(cè)序分析公司病毒全基因組測(cè)序具有的特點(diǎn):專業(yè)化服務(wù)。
二代測(cè)序可以用于對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序有哪些挑戰(zhàn)?二代測(cè)序相較sanger測(cè)序,差異主要就是單次運(yùn)行可以獲得海量的數(shù)據(jù)量,因此也稱為高通量測(cè)序。想要通過(guò)高通量測(cè)序獲得病毒全序列,需要經(jīng)歷:核酸純化-文庫(kù)構(gòu)建-生物信息學(xué)分析這三大基本流程。而高通量測(cè)序技術(shù)本身并不是以病毒為目標(biāo)開(kāi)發(fā)的,因此每個(gè)環(huán)節(jié)都是挑戰(zhàn)。核酸純化步驟決定了Input核酸的起始濃度和總量,從而決定了文庫(kù)構(gòu)建的成敗、質(zhì)量和產(chǎn)量;文庫(kù)的好壞決定了數(shù)據(jù)的質(zhì)量和產(chǎn)出;而數(shù)據(jù)的質(zhì)量產(chǎn)出直接影響分析結(jié)果。樣品一般核酸濃度很低,且?guī)в写罅克拗魑廴?,因此?shí)驗(yàn)部分和分析部分都比較困難。探普生物基于這些困難點(diǎn),進(jìn)行了大量有針對(duì)性的研發(fā)和測(cè)試,開(kāi)發(fā)了全套的實(shí)驗(yàn)和分析流程用于對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序,該流程自運(yùn)行以來(lái)廣受研究者們好評(píng)。
全基因組測(cè)序要注意的事項(xiàng):全基因組測(cè)序是對(duì)未知基因組序列的物種進(jìn)行個(gè)體的基因組測(cè)序。技術(shù)路線:提取基因組DNA,然后隨機(jī)打斷,電泳回收所需長(zhǎng)度的DNA的片段(0.2~5Kb),加上接頭,進(jìn)行DNA簇(Cluster)制備,后利用Paired-End(Solexa)或者M(jìn)ate-Pair(SOLiD)的方法對(duì)插入片段進(jìn)行測(cè)序。然后對(duì)測(cè)得的序列組裝成Contig,通過(guò)Paired-End的距離可進(jìn)一步組裝成Scaffold,進(jìn)而可組裝成染色體等。組裝效果與測(cè)序深度與覆蓋度、測(cè)序質(zhì)量等有關(guān)。常用的組裝有:SOAPdenovo、Trimity、Abyss等。測(cè)序深度(Sequencingdepth)是指測(cè)序得到的堿基總量(bp)與基因組大小的比值,它是評(píng)價(jià)測(cè)序量的指標(biāo)之一。測(cè)序深度與基因組覆蓋度之間是一個(gè)正相關(guān)的關(guān)系,測(cè)序帶來(lái)的錯(cuò)誤率或假陽(yáng)性結(jié)果會(huì)隨著測(cè)序深度的提升而下降。測(cè)序的個(gè)體,如果采用的是雙末端或Mate-Pair方案,當(dāng)測(cè)序深度在50X~100X以上時(shí),基因組覆蓋度和測(cè)序錯(cuò)誤率控制均得以保證,后續(xù)序列組裝成染色體才能變得更容易與準(zhǔn)確。病毒是由一種核酸分子與蛋白質(zhì)構(gòu)成或只由蛋白質(zhì)構(gòu)成。
深度測(cè)序技術(shù)對(duì)經(jīng)濟(jì)市場(chǎng)具有的影響:未來(lái)社會(huì)的創(chuàng)新驅(qū)動(dòng)將由信息技術(shù)向心理社會(huì)健康方面轉(zhuǎn)移??梢灶A(yù)見(jiàn),全球老年化社會(huì)到來(lái)后的經(jīng)濟(jì)主戰(zhàn)場(chǎng)將是健康行業(yè),而以基因測(cè)序預(yù)測(cè)健康和臨床準(zhǔn)確分型的市場(chǎng)將會(huì)越來(lái)越大。深度測(cè)序相關(guān)的經(jīng)濟(jì)市場(chǎng)有兩個(gè)方面。一是測(cè)序儀器和技術(shù)相關(guān)的市場(chǎng),二是測(cè)序應(yīng)用市場(chǎng)的競(jìng)爭(zhēng)。一個(gè)顯見(jiàn)的例子是,近年來(lái)深度測(cè)序技術(shù)促進(jìn)了對(duì)肺病的進(jìn)一步認(rèn)識(shí)和分型,更多的位點(diǎn)突變?nèi)鏏LK、ERCC1、MET、PI3K、RRM1等被陸續(xù)發(fā)現(xiàn),多基因檢測(cè)肺病致病驅(qū)動(dòng)基因?qū)︶t(yī)生準(zhǔn)確選擇靶向藥物十分重要。以肺病中常見(jiàn)的EGFR突變型為例,對(duì)于敏感性基因突變(19Del+L858R),第1代靶向藥物(如易瑞沙等)可以進(jìn)行良好的調(diào)整和控制;但是對(duì)于耐藥性基因突變(T790M),則需要第三代靶向藥物(AZD9291)才有較好的臨床效果。不久的將來(lái),病癥患者將獲得更具個(gè)性化的藥物,從而達(dá)到準(zhǔn)確醫(yī)療。高通量測(cè)序技術(shù)本身并不是以病毒為目標(biāo)開(kāi)發(fā)的。深圳病毒二代測(cè)序分析公司
Sanger測(cè)序準(zhǔn)確度高,讀長(zhǎng)很長(zhǎng)。深圳病毒二代測(cè)序分析公司
人類(lèi)的病毒性傳染很普遍,病毒可以通過(guò)呼吸道、消化道、皮膚等多種途徑進(jìn)行傳播,常常會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的公共健康問(wèn)題,對(duì)人類(lèi)的健康造成威脅。傳統(tǒng)的病毒檢測(cè)方法主要依賴于細(xì)胞培養(yǎng)法、抗原抗體結(jié)合法等,這些方法耗時(shí)久,靈敏度低,往往不能夠滿足臨床檢測(cè)需求。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,PCR方法用于病毒檢測(cè)的案例越來(lái)越多,但該方法的特異性限制了其同時(shí)檢測(cè)其它病毒的能力。因此,需要通過(guò)新的技術(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)。隨著二代測(cè)序技術(shù)成本的降低與普及,二代測(cè)序在臨床病原體檢測(cè)方面的優(yōu)勢(shì)也越加突顯。該技術(shù)基于二代測(cè)序平臺(tái),可以直接從樣本中獲得病原體的核酸序列信息,再通過(guò)生物信息學(xué)的方法對(duì)得到的序列進(jìn)行分析,可以快速地對(duì)樣本中可能存在的全部病原體進(jìn)行鑒定,縮短了臨床檢測(cè)的周期。深圳病毒二代測(cè)序分析公司
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