在轉(zhuǎn)染中，DNA通常通過病毒或非病毒載體(如質(zhì)粒)轉(zhuǎn)運到宿主細(xì)胞中。質(zhì)粒的基本結(jié)構(gòu)包括啟動子、復(fù)制起點、多個克隆位點、目標(biāo)基因和選擇標(biāo)記。質(zhì)粒復(fù)制需要復(fù)制的起源，而多個克隆位點包含獨特的內(nèi)切酶切割位點，用于插入外源基因。適當(dāng)?shù)恼婧藛幼?如CMV或EF-1a)的存在允許外源基因在宿主細(xì)胞中表達。質(zhì)粒DNA可以以線性和超螺旋DNA的形式轉(zhuǎn)染。與線性DNA相比，使用超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染通常會產(chǎn)生更高的效率，線性DNA更容易被外切酶降解。然而，線性化的DNA更具重組性，因此可以更容易地整合到宿主基因組中以實現(xiàn)穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染試劑的凍融被認(rèn)為是另一個可能影響轉(zhuǎn)染效率的潛在因素。天津高分子轉(zhuǎn)染試劑

目前核酸遞送系統(tǒng)的局限性之一是無法深入穿透組織和***，如實體瘤和大腦。通常情況下，只能到達并轉(zhuǎn)染細(xì)胞的外層，從而導(dǎo)致***效果不佳。愛潑斯坦巴爾病毒(EBV)，一種人類**病原體，似乎通過劫持**微環(huán)境中的外泌體進行細(xì)胞間通訊來克服這一點。外泌體是小的膜囊泡(40 ~ 200nm)，起源于內(nèi)吞。在被釋放到細(xì)胞外環(huán)境后，由于其表面存在細(xì)胞識別分子，它們可以與鄰近細(xì)胞融合。外泌體外泌體是細(xì)胞間mRNA、小rna (miRNA)和信號因子的載體，通過經(jīng)歷細(xì)胞內(nèi)化和釋放的幾個周期，能夠跨越幾層組織。它們可以由多種細(xì)胞分泌，包括腫瘤細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、B細(xì)胞、T細(xì)胞、上皮細(xì)胞和神經(jīng)元。利用外泌體途徑的一種潛在方法是將脂質(zhì)體核酸重新包裝到外泌體中。這可以通過靶向外泌體特異性的膜蛋白(如四跨蛋白和膜聯(lián)蛋白)并啟動脂質(zhì)體和外泌體之間的融合事件來實現(xiàn)。天津青島轉(zhuǎn)染試劑利用外泌體途徑的一種潛在方法是將脂質(zhì)體核酸重新包裝到外泌體中。

在7種轉(zhuǎn)染試劑(DAC-30、DC-30、Lipofectin、LipofectAMINEPLUS、Effectene、FuGene 6和superect)中，F(xiàn)uGene 6轉(zhuǎn)染HASMCs和α-10 SMCs的效率比較高。在這兩種細(xì)胞系中，superect產(chǎn)生的細(xì)胞毒性作用比較高，其次是DAC-30和Lipofectamine Plus，而FuGene 6被認(rèn)為對細(xì)胞系相對安全。在另一項比較人類和動物來源的不同細(xì)胞系轉(zhuǎn)染結(jié)果的研究中，豬氣管上皮細(xì)胞(PTE)被Effectene、Lipofectamine Plus和PEI等轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染的效率高于人類氣管上皮細(xì)胞(HTE)?；瘜W(xué)轉(zhuǎn)染后，轉(zhuǎn)染后的HTE也表現(xiàn)出比PTE更低的活力。兩項被引用研究的綜合結(jié)果認(rèn)為動物細(xì)胞系可能比人類細(xì)胞系更有效地轉(zhuǎn)染。懸浮細(xì)胞通常被認(rèn)為比貼壁細(xì)胞更難轉(zhuǎn)染，因為轉(zhuǎn)染復(fù)合物對細(xì)胞的潛在附著減少懸浮細(xì)胞表面。然而，一項比較Xfect、Lipofectamine2000、Nanofectamin、TransIT-X2和TransIT-2020效率的研究表明，除了Xfect之外，所有試劑轉(zhuǎn)染懸浮細(xì)胞的效率都高于貼壁細(xì)胞(Tammetal.，2016)。然而，相反觀察結(jié)果背后的原因在很大程度上仍不清楚，未來可能會進一步探索。核酸與轉(zhuǎn)染試劑的比例

隨著寡核苷酸生物合成產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，不同類型的修飾寡核苷酸也被引入市場，以提高小RNA寡核苷酸轉(zhuǎn)染的效率。其中一種是通過化學(xué)修飾來提高其與靶標(biāo)和阻斷外切酶活性的結(jié)合親和力的agomirs和antagomirs。agomir是一種人工修飾的雙鏈miRNA模擬物，旨在發(fā)揮比傳統(tǒng)miRNA模擬物更高的靶標(biāo)抑制活性(krtzfeldt另一方面，antagomir是一種專門設(shè)計的單鏈miRNA類似物，旨在抑制特定的miRNA。agomir和antagomir都被認(rèn)為更穩(wěn)定、更有效、更特異，而且與正常的模擬物或拮抗劑相比，對宿主細(xì)胞膜具有更高的結(jié)合親和力。鎖定核酸(LNA)是另一種修飾的寡核苷酸，其至少一個核苷酸具有額外的亞甲基橋，以增強其核糖環(huán)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。其鎖定的核糖結(jié)構(gòu)使得LNA比常用的寡核苷酸更短，從而使其比傳統(tǒng)的寡核苷酸表現(xiàn)出更高的效率、穩(wěn)定性和結(jié)合親和力。NA基寡核苷酸的應(yīng)用已被報道用于各種生化或功能分析，涉及遞送小RNA分子，如siRNA、miRNA和piRNA。一些基于NA基的轉(zhuǎn)染不需要轉(zhuǎn)染試劑，這可以比較大限度地減少轉(zhuǎn)染過程中試劑的二次效應(yīng)。研究已經(jīng)確定了陽離子脂質(zhì)體（CLs）的某些特征，這些特征增強了它們在體內(nèi)轉(zhuǎn)運核酸的能力。

在選擇合適的小RNA分子進行轉(zhuǎn)染相關(guān)功能分析之前，應(yīng)先確定其實驗需要。例如，siRNA*對一個靶標(biāo)具有高度特異性，而miRNA具有調(diào)節(jié)多個下游靶標(biāo)的潛力。如今，可以人工合成各種類型的短長度寡核苷酸來模仿小RNA分子，以研究這些小RNA分子的敲入/敲入/敲出效應(yīng)。常用的寡核苷酸可分為模擬物或拮抗劑。模擬物是一種基于rna的小寡核苷酸(可能是piRNA、miRNA或siRNA)，其結(jié)構(gòu)使其能夠與目標(biāo)mRNA結(jié)合以抑制其功能，從而導(dǎo)致特定基因的翻譯抑制。相反，拮抗劑是一種寡核苷酸，它將與互補的小RNA鏈(如miRNA)結(jié)合以拮抗其活性，從而增加目標(biāo)基因的表達?；瘜W(xué)轉(zhuǎn)染的效率可能取決于幾個因素，如使用的試劑類型、靶細(xì)胞的來源和性質(zhì)，以及選擇的DNA與試劑比例。天津高分子轉(zhuǎn)染試劑

陽離子脂質(zhì)體合成中常用的分子是中性脂質(zhì)二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)。天津高分子轉(zhuǎn)染試劑

影響物理轉(zhuǎn)染或機械轉(zhuǎn)染效率的因素在很大程度上取決于這些方法的基本原理。例如，電穿孔技術(shù)依賴于電場來增加宿主細(xì)胞膜的通透性，以內(nèi)化外來核酸。因此，電穿孔過程中的電壓和持續(xù)時間是決定電穿孔成功與否的重要因素。施加高壓的長時間電穿孔可能會導(dǎo)致細(xì)胞損傷并降低轉(zhuǎn)染效率。通過增加電脈沖的數(shù)量也可以提高電轉(zhuǎn)染效率，但這可能會降低細(xì)胞活力。另一方面，電轉(zhuǎn)染效率取決于所使用的細(xì)胞類型，每當(dāng)要電轉(zhuǎn)染一種新的細(xì)胞類型時，應(yīng)優(yōu)化電穿孔條件。一些細(xì)胞如T淋巴細(xì)胞，即使在標(biāo)準(zhǔn)的電穿孔條件下也可能轉(zhuǎn)染不良，而電轉(zhuǎn)染成纖維細(xì)胞通常可以產(chǎn)生良好的轉(zhuǎn)染結(jié)果。電穿孔緩沖液的組成是影響轉(zhuǎn)染效率的另一個關(guān)鍵參數(shù)。據(jù)報道，電穿孔緩沖液中的ATP酶抑制劑如利多卡因可提高電穿孔后的細(xì)胞活力，而使用K+-based緩沖液的轉(zhuǎn)染效率優(yōu)于Mg2+-based緩沖液。假設(shè)Mg2+離子在***ATP酶以恢復(fù)電穿孔后的離子穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮關(guān)鍵作用，以比較大限度地減少細(xì)胞死亡，但可能會降低轉(zhuǎn)染效率。因此，應(yīng)優(yōu)化由多種成分組成的合適的電穿孔緩沖液配方，以確保轉(zhuǎn)染效率和電穿孔后細(xì)胞活力之間的平衡。天津高分子轉(zhuǎn)染試劑