基因***是陽(yáng)離子聚合物作為轉(zhuǎn)染劑的主要應(yīng)用。通過(guò)攜帶質(zhì)粒DNA、mRNA和siRNA，陽(yáng)離子聚合物實(shí)現(xiàn)了與***相關(guān)的功能，如基因增強(qiáng)、基因抑制和基因組編輯?；?****直接、或許也是**簡(jiǎn)單的策略是添加新的蛋白質(zhì)編碼基因。在當(dāng)前**背景下，mRNA疫苗的大規(guī)模使用點(diǎn)燃了人們對(duì)核酸藥物的濃厚興趣。理論上，mRNA能夠表達(dá)任何一種蛋白質(zhì);因此，除了作為疫苗預(yù)防傳染病外，它還可以用于***其他疾病。目前的mRNA傳遞技術(shù)是基于脂質(zhì)納米顆粒平臺(tái)，該技術(shù)的**掌握在少數(shù)幾家公司手中。此外，由脂質(zhì)納米顆粒組成的mRNA疫苗應(yīng)在**溫下儲(chǔ)存和運(yùn)輸，這嚴(yán)重限制了疫苗在高溫或條件有限的地區(qū)的使用。因此，陽(yáng)離子聚合物特別適合作為脂質(zhì)體納米顆粒的替代品。在選擇合適的小RNA分子進(jìn)行轉(zhuǎn)染相關(guān)功能分析之前，應(yīng)先確定其實(shí)驗(yàn)需要。中國(guó)香港非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑

轉(zhuǎn)染是將外源核酸送入細(xì)胞的過(guò)程，其目的是使外源基因編碼的蛋白能夠在細(xì)胞中表達(dá)。這些編碼序列通常由質(zhì)粒DNA攜帶到細(xì)胞中，以研究其未知的功能或用于特定的***目的。此外，降低基因表達(dá)的siRNA也是核酸轉(zhuǎn)染的靶標(biāo)。通過(guò)siRNA的敲低作用，研究人員可以操縱愈合基因的表達(dá)來(lái)研究基因的功能和相互作用。siRNA在**研究、基因***、組織工程等方面發(fā)揮著重要作用。mRNA曾被認(rèn)為不適合用于基因***藥物，因?yàn)樗子诮到?。然而，研究人員通過(guò)化學(xué)修飾提高了其穩(wěn)定性，使其成為表達(dá)外源基因的理想核酸藥物。mRNA疫苗已用于預(yù)防COVID-19，許多用于*****的mRNA藥物正在開發(fā)中。裸核酸分子被細(xì)胞吸收的效率極低。這是因?yàn)楹怂崾怯H水、帶負(fù)電的生物分子，難以接近疏水、帶負(fù)電的脂質(zhì)細(xì)胞膜。因此，核酸分子必須通過(guò)載體傳遞到細(xì)胞中。核酸載體有兩種:病毒載體和非病毒載體。在轉(zhuǎn)染有效性和包裝能力方面，病毒載體表現(xiàn)良好。然而，病毒載體的缺點(diǎn)也不容忽視，比如容易引發(fā)炎癥反應(yīng)和基因突變。而非病毒載體的材料來(lái)源豐富，化學(xué)結(jié)構(gòu)可控，易于大量制備;因此，它們?cè)诤怂徂D(zhuǎn)染中具有不可替代的作用。天津長(zhǎng)沙轉(zhuǎn)染試劑但似乎找到一種既能改善基因表達(dá)又不影響細(xì)胞、不對(duì)細(xì)胞造成損害的技術(shù)也至關(guān)重要。

在7種轉(zhuǎn)染試劑(DAC-30、DC-30、Lipofectin、LipofectAMINEPLUS、Effectene、FuGene 6和superect)中，F(xiàn)uGene 6轉(zhuǎn)染HASMCs和α-10 SMCs的效率比較高。在這兩種細(xì)胞系中，superect產(chǎn)生的細(xì)胞毒性作用比較高，其次是DAC-30和Lipofectamine Plus，而FuGene 6被認(rèn)為對(duì)細(xì)胞系相對(duì)安全。在另一項(xiàng)比較人類和動(dòng)物來(lái)源的不同細(xì)胞系轉(zhuǎn)染結(jié)果的研究中，豬氣管上皮細(xì)胞(PTE)被Effectene、Lipofectamine Plus和PEI等轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染的效率高于人類氣管上皮細(xì)胞(HTE)。化學(xué)轉(zhuǎn)染后，轉(zhuǎn)染后的HTE也表現(xiàn)出比PTE更低的活力。兩項(xiàng)被引用研究的綜合結(jié)果認(rèn)為動(dòng)物細(xì)胞系可能比人類細(xì)胞系更有效地轉(zhuǎn)染。懸浮細(xì)胞通常被認(rèn)為比貼壁細(xì)胞更難轉(zhuǎn)染，因?yàn)檗D(zhuǎn)染復(fù)合物對(duì)細(xì)胞的潛在附著減少懸浮細(xì)胞表面。然而，一項(xiàng)比較Xfect、Lipofectamine2000、Nanofectamin、TransIT-X2和TransIT-2020效率的研究表明，除了Xfect之外，所有試劑轉(zhuǎn)染懸浮細(xì)胞的效率都高于貼壁細(xì)胞(Tammetal.，2016)。然而，相反觀察結(jié)果背后的原因在很大程度上仍不清楚，未來(lái)可能會(huì)進(jìn)一步探索。核酸與轉(zhuǎn)染試劑的比例

流式細(xì)胞術(shù)可以更精確地定量表達(dá)特定熒光基因的細(xì)胞，以評(píng)估轉(zhuǎn)染效率。另一種評(píng)估轉(zhuǎn)染效率的方法是通過(guò)監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)染后的特定蛋白表達(dá)。將轉(zhuǎn)基因引入細(xì)胞可能會(huì)改變由轉(zhuǎn)基因或細(xì)胞中其他基因編碼的蛋白質(zhì)的表達(dá)。同樣，轉(zhuǎn)染小RNA也可以調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞中特定下游遺傳靶點(diǎn)的表達(dá)。免疫印跡和免疫熒光染色可用于評(píng)估轉(zhuǎn)染后蛋白表達(dá)的變化。在這兩種方法中，使用特異性抗體結(jié)合靶蛋白是至關(guān)重要的，后者需要使用與一抗結(jié)合的熒光標(biāo)記二級(jí)抗體來(lái)檢測(cè)感興趣的蛋白質(zhì)。另一方面，在免疫印跡中，可以使用辣根過(guò)氧化物酶(HRP)偶聯(lián)的二抗與一抗結(jié)合，進(jìn)行特異性蛋白檢測(cè)。免疫印跡法允許對(duì)蛋白質(zhì)表達(dá)進(jìn)行半定量，而免疫熒光染色法允許通過(guò)熒光顯微鏡或流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行定量檢測(cè)。通過(guò)檢查特定蛋白表達(dá)來(lái)評(píng)估轉(zhuǎn)染效率更具可重復(fù)性和直接性。然而，使用抗體所固有的非特異性蛋白質(zhì)結(jié)合問(wèn)題和獲得假陰性結(jié)果的可能性，這可能是由于不及時(shí)測(cè)定蛋白質(zhì)表達(dá)引起的，仍然是使用這些方法的缺點(diǎn)。肌內(nèi)注射脂質(zhì)體不能引起強(qiáng)烈的毒性反應(yīng)，這與肺內(nèi)或靜脈注射途徑的情況不同。

由于CRISPR/Cas的發(fā)現(xiàn)，基因組編輯領(lǐng)域經(jīng)歷了一場(chǎng)**。細(xì)菌免疫系統(tǒng)的CRIPSR/Cas成分導(dǎo)致全基因組雙鏈DNA斷裂，并通過(guò)內(nèi)部DNA修復(fù)過(guò)程促進(jìn)基因編輯。有研究指出，陽(yáng)離子聚合物聚乙二胺-環(huán)糊精(PC)有助于編碼Cas9和sgRNA的質(zhì)粒的有效遞送。當(dāng)大質(zhì)粒通過(guò)PC傳遞時(shí)，它們可以以高N/P比聚結(jié)并包裹質(zhì)粒;這有效地編輯了兩個(gè)基因組位點(diǎn):血紅蛋白亞基β(19.1%)和菱形5同源物1(RHBDF1(7.0%))。研究人員開發(fā)了巨噬細(xì)胞特異性啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的Cas9表達(dá)質(zhì)粒(pM458和pM330)，并將其包裹在陽(yáng)離子脂質(zhì)輔助PEG-b-PLGA納米顆粒中，以解決無(wú)法在靶組織和細(xì)胞中進(jìn)行精確基因編輯的問(wèn)題(CLAN)?；陉?yáng)離子聚合物的基因***在臨床試驗(yàn)中顯示出巨大的潛力，但由于研究仍處于早期階段，目前大多數(shù)研究都處于臨床前階段。小RNA和質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染可用于評(píng)估轉(zhuǎn)染效率。北京轉(zhuǎn)染試劑檢測(cè)

納米顆粒的主要特性使它們能夠用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染。中國(guó)香港非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑

隨著寡核苷酸生物合成產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，不同類型的修飾寡核苷酸也被引入市場(chǎng)，以提高小RNA寡核苷酸轉(zhuǎn)染的效率。其中一種是通過(guò)化學(xué)修飾來(lái)提高其與靶標(biāo)和阻斷外切酶活性的結(jié)合親和力的agomirs和antagomirs。agomir是一種人工修飾的雙鏈miRNA模擬物，旨在發(fā)揮比傳統(tǒng)miRNA模擬物更高的靶標(biāo)抑制活性(krtzfeldt另一方面，antagomir是一種專門設(shè)計(jì)的單鏈miRNA類似物，旨在抑制特定的miRNA。agomir和antagomir都被認(rèn)為更穩(wěn)定、更有效、更特異，而且與正常的模擬物或拮抗劑相比，對(duì)宿主細(xì)胞膜具有更高的結(jié)合親和力。鎖定核酸(LNA)是另一種修飾的寡核苷酸，其至少一個(gè)核苷酸具有額外的亞甲基橋，以增強(qiáng)其核糖環(huán)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。其鎖定的核糖結(jié)構(gòu)使得LNA比常用的寡核苷酸更短，從而使其比傳統(tǒng)的寡核苷酸表現(xiàn)出更高的效率、穩(wěn)定性和結(jié)合親和力。NA基寡核苷酸的應(yīng)用已被報(bào)道用于各種生化或功能分析，涉及遞送小RNA分子，如siRNA、miRNA和piRNA。一些基于NA基的轉(zhuǎn)染不需要轉(zhuǎn)染試劑，這可以比較大限度地減少轉(zhuǎn)染過(guò)程中試劑的二次效應(yīng)。中國(guó)香港非脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑