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山東富舜新材料科技有限公司座落在美麗的“泉城”濟(jì)南。公司是集化學(xué)科研、開發(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)為一體的綜合型企業(yè)。我公司擁有的生產(chǎn)設(shè)備,完善的產(chǎn)品檢測手段和體系。我公司的員工具有較強(qiáng)的責(zé)任感。經(jīng)過多年的發(fā)展,現(xiàn)已形成添加劑、阻燃劑、和化工助劑三大類上百個品種。公司本著“誠信經(jīng)營、專注品質(zhì)”的宗旨,參與到激烈的市場競爭中來,以好的產(chǎn)品質(zhì)量,優(yōu)惠的產(chǎn)品價格,令人滿意的銷售服務(wù),贏得大家的支持與信賴。山東富舜新材料科技有限公司的誠信、實(shí)力和產(chǎn)品質(zhì)量獲得業(yè)界的認(rèn)可。歡迎各界朋友蒞臨參觀、指導(dǎo)和業(yè)務(wù)洽談。
考馬斯亮藍(lán)G-250法測定蛋白質(zhì)含量的原理是什么
在酸性條件下,考馬斯亮蘭G-250染料與蛋白質(zhì)疏水區(qū)結(jié)合,導(dǎo)致da吸收峰由465 nm 變?yōu)?95 nm,同時顏色也由棕色變?yōu)樗{(lán)色,該藍(lán)色化合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度的高低成正比關(guān)系。將蛋白質(zhì)樣品或稀釋的BSA 與Bradford試劑混合,測量在595 nm處的吸收值,在建立由一系列稀釋的BSA建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線的情況下,工業(yè)級亮藍(lán)廠家,蛋白質(zhì)的濃度可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線而確定。
考馬斯亮藍(lán)G-250(Coomassie brilliant blue G-250)測定蛋白質(zhì)含量屬于染料結(jié)合法的一種。在游離狀態(tài)下呈紅色,da光吸收在488nm;當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)榍嗌?,蛋白質(zhì)-色素結(jié)合物在595nm波長下有da光吸收。其光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比,因此可用于蛋白質(zhì)的定量測定。蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍(lán)G-250結(jié)合在2min左右的時間內(nèi)達(dá)到平衡,完成反應(yīng)十分迅速;其結(jié)合物在室溫下1h內(nèi)保持穩(wěn)定。
該法是1976年Bradford建立,試劑配制簡單,操作簡便快捷,工業(yè)級亮藍(lán)生產(chǎn)廠家,反應(yīng)非常靈敏,靈敏度比Lowry法還高4倍,可測定微克級蛋白質(zhì)含量,測定蛋白質(zhì)濃度范圍為0~1 000μg/mL,xaio可測2.5μg/mL蛋白質(zhì),是一種常用的微量蛋白質(zhì)快速測定方法。
考馬斯亮藍(lán)有G250和R250兩種。其中考馬斯亮藍(lán)G250由于與蛋白質(zhì)的結(jié)合反應(yīng)十分迅速,常用來作為蛋白質(zhì)含量的測定??捡R斯亮藍(lán)R250與蛋白質(zhì)反應(yīng)雖然比較緩慢,但是可以被洗脫下去,所以可以用來對電泳條帶染色。
中文名:亮藍(lán)
英文名:Brilliant Blue
化學(xué)式:C47H48N3NaO7S2
CAS號:6104-58-1、3844-45-9
摩爾質(zhì)量:854.02
外觀:帶金屬光澤的深紫至青銅色顆?;蚍勰?/p>
熔點(diǎn):100°C℃
閃點(diǎn):11℃ 分子式:C37H34N2Na2O9S3分子量:792.85保質(zhì)期為5年
《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》(GB2760-1996)中規(guī)定:亮藍(lán)可用于果味型飲料(液、固體)、果汁型飲料、汽水、配制酒、糖果、糕點(diǎn)上彩裝、紅綠絲、罐頭、濃縮果汁、青梅、對蝦片,使用量為0.025g/kg;冰淇淋,使用量為0.021999g/kg。紅綠絲的使用量可加倍;果味粉著色劑加入量按稀釋倍數(shù)的50%加入
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考馬斯亮藍(lán)染色?使用說明:
? 1.?常規(guī)染色脫色方法:
? a.?電泳結(jié)束后,取凝膠放入適量考馬斯亮藍(lán)染色液中,確保染色液可以充分覆蓋凝膠。
?b.?置于水平搖床或側(cè)擺搖床上緩慢搖動,室溫染色1小時或更長時間。? 注:具體的染色時間取決于凝膠的厚度和染色時的溫度。凝膠較厚,溫度較低,則染色時間宜適當(dāng)延長。凝膠較薄,溫度較高,則染色時間可以適當(dāng)縮短。通常染色至凝膠的顏色和染色液的顏色非常接近,在染色液中幾乎看不清凝膠時,可以認(rèn)為已染色充分。染色2-4個小時或更長時間不會對終的染色效果產(chǎn)生fu面影響。?
c.?倒出染色液。染色液可以回收重復(fù)使用至少2-3次。
? d.?加入適量考馬斯亮藍(lán)染色脫色液,確保脫色液可以充分覆蓋凝膠。
? e.?置于水平搖床或側(cè)擺搖床上緩慢搖動,室溫脫色4-24小時。期間更換脫色液2-4次,直至藍(lán)色背景基本上全部被脫去,并且蛋白條帶染色效果達(dá)到預(yù)期。通常蛋白條帶在脫色1-2小時后即可出現(xiàn)。? 注:脫色期間可以在脫色液中加入一片吸水紙,可以使部分染料吸附在吸水紙上,加快脫色。脫色時間過長也會導(dǎo)致蛋白條帶的顏色變淺。
? f.?完成脫色后,可以把凝膠保存在水中,用于后續(xù)的拍照等。保存在水中的凝膠會發(fā)生溶漲。如需避免溶漲,可以把膠保? 存在含20%甘油的水中。長期保存可以制備干膠。?
2.?快速染色脫色方法:?
a.?電泳結(jié)束后,日照工業(yè)級亮藍(lán),取膠放入適量考馬斯亮藍(lán)染色液中,微波爐加熱至接近沸騰或剛剛沸騰,工業(yè)級亮藍(lán)批發(fā),立即停止加熱。通常對于膠濃度大于10%的膠比較堅韌,在發(fā)生煮沸時不易破損;對于膠濃度小于10%的膠,宜盡量避免煮沸,以免出現(xiàn)膠碎裂的情況。
?b.?隨后在染色液溫度較高的情況下,在室溫?fù)u床上搖動5-10分鐘。
? c.?倒出染色液。染色液可以回收重復(fù)使用至少2-3次。
? d.?加入適量考馬斯亮藍(lán)染色脫色液,確保染色液可以充分覆蓋凝膠。
? e.?微波爐加熱至接近沸騰或剛剛沸騰,立即停止加熱。
? f.?隨后在脫色液溫度較高的情況下,在搖床上搖動5-10分鐘。此時通常可以觀察到比較清楚的蛋白條帶。
? g.?更換新鮮的脫色液,重復(fù)步驟e和步驟f,直至藍(lán)色背景基本上全部被脫去,蛋白條帶染色效果達(dá)到預(yù)期。?
企業(yè): 山東富舜新材料科技有限公司
手機(jī): 18668970119
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