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考馬斯亮藍G-250法測定蛋白質(zhì)含量的原理是什么

     在酸性條件下，考馬斯亮蘭G-250染料與蛋白質(zhì)疏水區(qū)結合，導致da吸收峰由465 nm 變?yōu)?95 nm，同時顏色也由棕色變?yōu)樗{色，該藍色化合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度的高低成正比關系。將蛋白質(zhì)樣品或稀釋的BSA 與Bradford試劑混合，測量在595 nm處的吸收值，在建立由一系列稀釋的BSA建立的標準曲線的情況下，蛋白質(zhì)的濃度可以根據(jù)標準曲線而確定。

    考馬斯亮藍G-250（Coomassie brilliant blue G-250）測定蛋白質(zhì)含量屬于染料結合法的一種。在游離狀態(tài)下呈紅色，食用藍色1號供應商，da光吸收在488nm；當它與蛋白質(zhì)結合后變?yōu)榍嗌秤盟{色1號生產(chǎn)廠家，蛋白質(zhì)-色素結合物在595nm波長下有da光吸收。其光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比，因此可用于蛋白質(zhì)的定量測定。蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍G-250結合在2min左右的時間內(nèi)達到平衡，完成反應十分迅速；其結合物在室溫下1h內(nèi)保持穩(wěn)定。

    該法是1976年Bradford建立，試劑配制簡單，池州食用藍色1號，操作簡便快捷，反應非常靈敏，靈敏度比Lowry法還高4倍，可測定微克級蛋白質(zhì)含量，測定蛋白質(zhì)濃度范圍為0～1 000μg/mL，xaio可測2.5μg/mL蛋白質(zhì)，是一種常用的微量蛋白質(zhì)快速測定方法。

考馬斯亮藍有G250和R250兩種。其中考馬斯亮藍G250由于與蛋白質(zhì)的結合反應十分迅速，常用來作為蛋白質(zhì)含量的測定?？捡R斯亮藍R250與蛋白質(zhì)反應雖然比較緩慢，但是可以被洗脫下去，所以可以用來對電泳條帶染色。

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?本考馬斯亮藍染色試劑盒(Commassie?Blue?Staining?Kit)采用了經(jīng)典的考馬斯亮藍染色和脫色方法，以考馬斯亮藍R250為染料，可用于SDS-PAGE或非變性PAGE等蛋白電泳凝膠的常規(guī)染色和脫色，或Western轉膜后PAGE膠上殘余蛋白的檢測。?

 ???使用本試劑盒，采用常規(guī)染色脫色方法累計時間達到2-3小時后可以觀察到蛋白條帶；采用快速染色脫色方法20分鐘左右即可觀察到蛋白條帶。觀察到清晰的蛋白條帶則需染色脫色更長時間。?

 ???本試劑盒中的染色液和脫色液經(jīng)過改良，不含有毒的jia醇，但含有刺激性氣味的yi酸。

英文別名 Bis[4-(N-ethyl-N-3-sulfophenylmethyl)aminophenyl]-2-sulfophenylmethylium disodium salt; C.I. Food Blue 2; Acid Blue 9; Alphazurine FG; C.I. 42090中文別名 [[[4-[N-N-（3′-磺基苯）-氨基、、-（2′-磺基）-亞]-2，5-亞環(huán)己二烯基]-（3′-磺基苯）-胺二鈉鹽、C.I.食品藍2(42090)、食用亮藍、雙[4-(N--N-3-磺酸苯)氨基]-2-磺酸基二鈉鹽、食用色素亮藍；罌紅二鈉鹽;亮藍1、酸性藍 9 [CI 42090]、藍 1 [CI 42090];食品藍1/羊毛罌紅A;食用青色1號(日本名)、食用色素藍1號;-間磺基芐基-{4"-[4""-(間磺基芐基-)-鄰磺基亞]-2"，5-亞}-氫氧化銨內(nèi)鹽之二鈉鹽、食用色素藍1號、-間磺基芐基-{4"-[4""-(間磺基芐基--鄰磺基亞}-2"5-亞}-氫氧化銨內(nèi)鹽之二鈉鹽;食品藍1/羊毛罌紅A /亮藍。CAS NO.3844-45-9EINECS 223-339-8




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