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PCR核酸檢測(cè)技術(shù)在新冠肺yan疫情檢測(cè)中發(fā)揮了重要作用,但由于該技術(shù)將待檢測(cè)核酸多次擴(kuò)增,所以非常小污染也容易導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)中的污染不僅會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量和結(jié)果,還會(huì)危害實(shí)驗(yàn)室工作人員的健康。
PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)完成,進(jìn)行實(shí)驗(yàn)過(guò)程中易發(fā)生污染產(chǎn)生污染主要原因:
① 這也是常見(jiàn)的污染原因。重復(fù)擴(kuò)增后,PCR產(chǎn)物的黏貼遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)PCR的檢測(cè)限制,所以即使是少量的污染也足以造成假陽(yáng)性結(jié)果。
② 試劑的污染。在試劑的配制過(guò)程中,接觸了污染的容器、移液器、槍頭、溶液等物導(dǎo)致試劑被污染。
PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)可以是分散或組合的形式。完成一組PCR實(shí)驗(yàn),通常有四個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程:試劑制備、樣品處理、核酸擴(kuò)增和產(chǎn)物分析。如果實(shí)驗(yàn)過(guò)程需要,應(yīng)增加樣品粉碎過(guò)程。
分散形式PCR實(shí)驗(yàn)室
所謂分散式PCR實(shí)驗(yàn)室,是指完成上述實(shí)驗(yàn)過(guò)程的各個(gè)實(shí)驗(yàn)室相互遠(yuǎn)離,分散布置。對(duì)于這種布置形式的PCR實(shí)驗(yàn)室,由于各個(gè)實(shí)驗(yàn)之間不易相互干擾,因此無(wú)需特殊條件要求。
PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)完成,進(jìn)行實(shí)驗(yàn)過(guò)程中易發(fā)生污染產(chǎn)生污染主要有以下4個(gè)原因:
① 這也是常見(jiàn)的污染原因。重復(fù)擴(kuò)增后,PCR產(chǎn)物的粘貼遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)PCR的檢測(cè)限制,所以即使是少量的污染也足以造成假陽(yáng)性結(jié)果。
③ 待測(cè)樣品被污染。放置樣品的容器被污染或由于容器密封不嚴(yán)導(dǎo)致樣品與外界接觸被污染;其次在核酸提取過(guò)程中使用了被污染的移液器或槍頭導(dǎo)致樣品被污染;另外,某些樣品中含有病毒,若彌散到空氣中則有可能形成交叉污染。
④ 氣溶膠污染。如果氣溶膠中含有的病毒等污染物擴(kuò)散到空氣中,很有可能造成PCR產(chǎn)物的污染。氣溶膠是由空氣和液體表面的摩擦產(chǎn)生的,打開(kāi)蓋子,搖動(dòng)反應(yīng)管,污染采樣器反復(fù)吸取樣品,就會(huì)形成氣溶膠,造成交叉污染。據(jù)計(jì)算一個(gè)氣溶膠顆??珊?8 000 拷貝,因此,應(yīng)尤其重視由氣溶膠導(dǎo)致污染的問(wèn)題。PCR 實(shí)驗(yàn)室只要出現(xiàn)了污染,之前的結(jié)果報(bào)告就變?yōu)闊o(wú)效而且也無(wú)法進(jìn)行其他的實(shí)驗(yàn)操作。需要找出并清除污染源,才能得到準(zhǔn)確有效的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
以上就是為大家介紹的關(guān)于PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)中產(chǎn)生污染的四個(gè)原因,因?yàn)閷?shí)驗(yàn)室要求無(wú)菌的特殊環(huán)境,所以我們?cè)诟鱾€(gè)細(xì)節(jié)都需要注意,嚴(yán)謹(jǐn)觸碰安全底線。
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PCR實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)細(xì)則:
1、首先填寫(xiě)PCR實(shí)驗(yàn)室的相關(guān)技術(shù)驗(yàn)收申請(qǐng)表;
2、報(bào)告PCR實(shí)驗(yàn)室的基本情況,包括檢驗(yàn)科以及基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室基本運(yùn)行情況,必要性與可行性,著重分析開(kāi)展項(xiàng)目運(yùn)行情況、人員配置現(xiàn)狀、內(nèi)部質(zhì)量管理體系執(zhí)行情況與效果分析;
3、yi療機(jī)構(gòu)執(zhí)業(yè)許可證;
4、模擬設(shè)置PCR實(shí)驗(yàn)室醫(yī)院的yi療衛(wèi)生資源狀況、對(duì)PCR實(shí)驗(yàn)室的需求情況以及實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行的預(yù)測(cè)分析;
5、實(shí)驗(yàn)室的平面設(shè)置圖;
6、實(shí)驗(yàn)室主要負(fù)責(zé)人簡(jiǎn)歷表;
7、實(shí)驗(yàn)室工作人員一覽表(附實(shí)驗(yàn)室工作人員簡(jiǎn)歷);
8、提供PCR實(shí)驗(yàn)室的主要儀器設(shè)備表;
9、擬開(kāi)展的PCR實(shí)驗(yàn)室診斷項(xiàng)目;
10、相關(guān)的質(zhì)量手冊(cè);
11、檢驗(yàn)報(bào)告單2份;