抑菌效力

銅綠假單胞菌菌懸液：接種銅綠假單胞菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基中，30～35℃培養(yǎng)18～24小時(shí)；取上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至  

用比濁法制成每1ml含菌數(shù)約為108cfu。

8.2.2金黃色pt球菌菌懸液：接種金黃色pt球菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基，30～35℃培養(yǎng)18～24小時(shí)；取上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至             ，用比濁法制成每1ml含菌數(shù)約為108cfu。

微生物計(jì)數(shù)

1.血細(xì)胞計(jì)數(shù)法

將稀釋的菌液樣品滴在血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上，在顯微鏡下計(jì)算4~5個(gè)中格的細(xì)菌數(shù)，并求出每個(gè)小格所含細(xì)菌的平均數(shù)，再以此為依據(jù)，估算總菌數(shù)。

①此法的缺點(diǎn)是不能區(qū)分死菌和活菌。

②對壓在小方格界線上的細(xì)菌，應(yīng)當(dāng)取平均值計(jì)數(shù)。

③此法可用于測定培養(yǎng)液中酵母jun種群數(shù)量的變化

2.稀釋涂布平板法

原理:每個(gè)活細(xì)菌在適宜的培養(yǎng)基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落。培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。

①這一方法常用來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目

②統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，原因是當(dāng)兩個(gè)活多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。因此統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來表示。

③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細(xì)菌、酵母、芽孢與孢子等的數(shù)量均可用此法測定。但不適于測定樣品中絲狀體微生物，例如放線jun或絲狀真菌或絲狀藍(lán)細(xì)菌等的營養(yǎng)體等。

④此法若不培養(yǎng)成菌落，可通過將一定量的菌液均勻地涂布在玻片上的一定面積上，經(jīng)固定染色后在顯微鏡下計(jì)數(shù)，這樣又稱涂片計(jì)數(shù)法。染色可用臺盼藍(lán)，臺盼藍(lán)能使死細(xì)胞染成藍(lán)色，可分別計(jì)數(shù)死細(xì)胞和huo細(xì)胞。

微生物限度檢查

計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)中，采用平皿法或薄膜過濾法時(shí)，試驗(yàn)組菌落數(shù)減去供試品對照組菌落數(shù)的值與菌液對照組菌落數(shù)的比值應(yīng)在0.5～2范圍內(nèi)；在我國現(xiàn)有的國家標(biāo)準(zhǔn)中，致病菌一般指"腸道致病菌和致病性球菌"，主要包括沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄qiu菌、致病性鏈球菌等四種，致病菌不允許在食品中檢出。采用MPN法時(shí)，試驗(yàn)組菌數(shù)應(yīng)在菌液對照組菌數(shù)的95%置信限內(nèi)。若各試驗(yàn)菌的回收試驗(yàn)均符合要求，照所用的供試液制備方法及計(jì)數(shù)方法進(jìn)行該供試品的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)計(jì)數(shù)。

   方法適用性確認(rèn)時(shí)，若采用上述方法還存在一株或多株試驗(yàn)菌的回收達(dá)不到要求，那么選擇回收接近要求的方法和試驗(yàn)條件進(jìn)行供試品的檢查。

   供試品檢查

   檢驗(yàn)量

   檢驗(yàn)量即一次試驗(yàn)所用的供試品量（g、ml或c㎡）。

   一般應(yīng)隨機(jī)抽取不少于2個(gè)zui小包裝的供試品，混合，取規(guī)定量供試品進(jìn)行檢驗(yàn)。

   除另有規(guī)定外，一般供試品的檢驗(yàn)量為10g或10ml；膜劑為100c㎡；貴重藥品、微量包裝藥品的檢驗(yàn)量可以酌減。檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)從2個(gè)以上zui小包裝單位中抽取供試品，大蜜丸還不得少于4丸，膜劑還不得少于4片。

   供試品的檢查

   按計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的計(jì)數(shù)方法進(jìn)行供試品中需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)的測定。

   胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基用于測定需氧菌總數(shù)；沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基用于測定霉菌和酵母菌總數(shù)。

   陰性對照試驗(yàn) 以稀釋液代替供試液進(jìn)行陰性對照試驗(yàn)，陰性對照試驗(yàn)應(yīng)無菌生長，如果陰性對照有菌生長，應(yīng)進(jìn)行偏差調(diào)査。

1.平皿法

   平皿法包括傾注法和涂布法。除另有規(guī)定外，取規(guī)定量供試品，按方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的方法進(jìn)行供試液制備和菌數(shù)測定，每稀釋級每種培養(yǎng)基至少制備2個(gè)平板。

   培養(yǎng)和計(jì)數(shù) 除另有規(guī)定外，胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板在30～35℃培養(yǎng)3～5天，沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板在20～25℃培養(yǎng)5～7天，觀察菌落生長情況，點(diǎn)計(jì)平板上生長的所有菌落數(shù)，計(jì)數(shù)并報(bào)告。菌落蔓延生長成片的平板不宜計(jì)數(shù)。點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)后，計(jì)算各稀釋級供試液的平均菌落數(shù)，按菌數(shù)報(bào)告規(guī)則報(bào)告菌數(shù)。除另有規(guī)定外，本檢查法中細(xì)菌及控制菌培養(yǎng)溫度為30℃~35℃。若同稀釋級兩個(gè)平板的菌落數(shù)平均值不小于15，則兩個(gè)平板的菌落數(shù)不能相差1倍或以上。

   菌數(shù)報(bào)告規(guī)則 需氧菌總數(shù)測定宜選取平均菌落數(shù)小于300cfu的稀釋級、霉菌和酵母菌總數(shù)測定宜選取平均菌落數(shù)小于100cfu的稀釋級，作為菌數(shù)報(bào)告的依據(jù)。取zui高的平均菌落數(shù)，計(jì)算1g、1ml或10c㎡供試品中所含的微生物數(shù)，取兩位有效數(shù)字報(bào)告。(1)接種滅菌(2)開啟棉塞(3)管口滅菌(4)挑起菌苔(5)接種(6)塞好棉塞。

   如各稀釋級的平板均無菌落生長，或僅zui低稀釋級的平板有菌落生長，但平均菌落數(shù)小于1 時(shí)，以<1 乘以zui低稀釋倍數(shù)的值報(bào)告菌數(shù)。