本試劑盒利用競爭酶聯(lián)免l疫分析方法來測定細(xì)胞提取物或體外腺苷酸環(huán)化酶實(shí)驗(yàn)中的cAMP的水平。簡而言之，將羊抗鼠多克l隆抗l體包被在酶標(biāo)板上，細(xì)胞提取物或體外腺苷酸環(huán)化酶實(shí)驗(yàn)中的cAMP與固定數(shù)量的偶聯(lián)辣根過氧化物酶的cAMP或堿性磷酸酶競爭性的結(jié)合抗cAMP單克l隆抗l體，已知的cAMP作為標(biāo)準(zhǔn)品來做標(biāo)準(zhǔn)曲線。經(jīng)過一段時間孵育，洗掉所有試劑，加入底物進(jìn)行顯色。將多孔板置于酶標(biāo)l儀上，于450nm或405nm波長下，進(jìn)行讀數(shù)。黃色的光強(qiáng)度與樣品中cAMP的濃度呈反比關(guān)系。基于cAMP標(biāo)準(zhǔn)品所得曲線，通過測得的光密度可以計算出樣品中cAMP的濃度。

注意步驟

1. 在使用前，將所有試劑放置30分鐘，平衡至室溫。

2. 用試劑預(yù)先潤洗槍頭在使用；取各種樣品、標(biāo)準(zhǔn)品和試劑必需更換槍頭。

3. 移取標(biāo)準(zhǔn)品和樣品到微孔底部。

4. 從微孔的邊緣加入試劑，以避免污染。

5. 本試劑盒使用可拆分的微孔酶標(biāo)條，使用者可根據(jù)樣品量多少進(jìn)行拆分。未使用的酶標(biāo)條保持干燥，密封于試劑盒提供的鋁封袋中，于4℃保存。微孔酶標(biāo)條需安裝在相應(yīng)的框架上使用。

6. 在加入顯色底物前，確保微孔內(nèi)沒有殘留的洗滌液。微量殘留的洗滌液可能導(dǎo)致分析結(jié)果的變化。

實(shí)驗(yàn)步驟

使用前將各種試劑取出放置30分鐘，平衡至室溫。所有標(biāo)準(zhǔn)品和樣品必需設(shè)置平行對照實(shí)驗(yàn)。

快速加入試劑至樣品中，立即漩渦震蕩2秒混勻。

1. 依據(jù)實(shí)驗(yàn)鍵盤紙決定酶標(biāo)條的使用量，將剩余的酶標(biāo)條連同干燥劑一起放回密封塑料袋，密封，4℃保存。

2. 移取50μL中和液至各個微孔中，除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。

3. 移取100μL 0.1M HCl至NSB(非特異結(jié)合)孔和B0孔(0 pmol/mL cAMP標(biāo)準(zhǔn)品)。

4. 移取100μL cAMP標(biāo)準(zhǔn)品至相應(yīng)的孔。

5. 移取100μL樣品至相應(yīng)的孔。

6. 移取50μL 0.1M HCl至NSB(非特異結(jié)合)孔。7. 移取50μL 偶聯(lián)酶至各孔中，除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。

8. 移取50μL 抗l體工作液至各孔中，除了TA(全活性)孔、Blank(空白)孔和NSB(非特異結(jié)合)孔。

9. 將酶標(biāo)孔置于孔板振動器上，250~500rpm，室溫孵育2小時。

10. 在吸水紙上拍干微孔內(nèi)溶液，加洗滌液400μL每孔洗3次，每次需拍干。

11. 后一次洗滌，清空各微孔，在干凈的無塵吸水紙上輕巧酶標(biāo)板數(shù)次，以確保沒有洗滌液殘留。

12. 加5μL 偶聯(lián)酶至TA(全活性)孔。

13. 每孔200μL顯色底物溶液，于室溫靜置5~30分鐘。（顯色底物A和B需在臨用前15分鐘內(nèi)等體積混合，并避光放置。）

14. 每孔加入50μL終止液。終止后立即讀數(shù)。

15. 清除酶標(biāo)l儀Blank(空白)孔值，讀取450nm處的光密度值，在570nm至590nm之間有修正。如果酶標(biāo)l儀不能自動清除Blank(空白)孔值，那么手動扣除每個讀數(shù)的Blank(空白)孔光密度值。

武漢紐斯特生物科技有限公司（WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd），系美國生命科學(xué)試劑供應(yīng)商美國NewEastBio在中國的子公司。公司位于武漢東湖高新技術(shù)開發(fā)區(qū)光谷生物城.美國NewEastBio專注于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域，主要產(chǎn)品有小分子、ELISA試劑盒、蛋白等。

臨床測定技術(shù)的發(fā)展主要在于方法學(xué)的發(fā)展，而方法學(xué)的發(fā)展依托于試劑生產(chǎn)技術(shù)不斷進(jìn)步更新和型標(biāo)記物的應(yīng)用。分子生物學(xué)正在并肯定會讓對整個生命科學(xué)有一個全l面而徹底的認(rèn)識，其對免l疫測定技術(shù)發(fā)展的影響也是直接而又有效的，對以前一些難以檢測的生物活性物質(zhì)的測定，并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。