本試劑盒利用競爭酶聯免l疫分析方法來測定細胞提取物或體外腺苷酸環(huán)化酶實驗中的cAMP的水平。簡而言之，將羊抗鼠多克l隆抗l體包被在酶標板上，細胞提取物或體外腺苷酸環(huán)化酶實驗中的cAMP與固定數量的偶聯辣根過氧化物酶的cAMP或堿性磷酸酶競爭性的結合抗cAMP單克l隆抗l體，已知的cAMP作為標準品來做標準曲線。經過一段時間孵育，洗掉所有試劑，加入底物進行顯色。將多孔板置于酶標l儀上，于450nm或405nm波長下，進行讀數。黃色的光強度與樣品中cAMP的濃度呈反比關系?；赾AMP標準品所得曲線，通過測得的光密度可以計算出樣品中cAMP的濃度。

注意步驟

1. 在使用前，將所有試劑放置30分鐘，平衡至室溫。

2. 用試劑預先潤洗槍頭在使用；取各種樣品、標準品和試劑必需更換槍頭。

3. 移取標準品和樣品到微孔底部。

4. 從微孔的邊緣加入試劑，以避免污染。

5. 本試劑盒使用可拆分的微孔酶標條，使用者可根據樣品量多少進行拆分。未使用的酶標條保持干燥，密封于試劑盒提供的鋁封袋中，于4℃保存。微孔酶標條需安裝在相應的框架上使用。

6. 在加入顯色底物前，確保微孔內沒有殘留的洗滌液。微量殘留的洗滌液可能導致分析結果的變化。

實驗步驟

使用前將各種試劑取出放置30分鐘，平衡至室溫。所有標準品和樣品必需設置平行對照實驗。

快速加入試劑至樣品中，立即漩渦震蕩2秒混勻。

1. 依據實驗鍵盤紙決定酶標條的使用量，將剩余的酶標條連同干燥劑一起放回密封塑料袋，密封，4℃保存。

2. 移取50μL中和液至各個微孔中，除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。

3. 移取100μL 0.1M HCl至NSB(非特異結合)孔和B0孔(0 pmol/mL cAMP標準品)。

4. 移取100μL cAMP標準品至相應的孔。

5. 移取100μL樣品至相應的孔。

6. 移取50μL 0.1M HCl至NSB(非特異結合)孔。7. 移取50μL 偶聯酶至各孔中，除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。

8. 移取50μL 抗l體工作液至各孔中，除了TA(全活性)孔、Blank(空白)孔和NSB(非特異結合)孔。

9. 將酶標孔置于孔板振動器上，250~500rpm，室溫孵育2小時。

10. 在吸水紙上拍干微孔內溶液，加洗滌液400μL每孔洗3次，每次需拍干。

11. 后一次洗滌，清空各微孔，在干凈的無塵吸水紙上輕巧酶標板數次，以確保沒有洗滌液殘留。

12. 加5μL 偶聯酶至TA(全活性)孔。

13. 每孔200μL顯色底物溶液，于室溫靜置5~30分鐘。（顯色底物A和B需在臨用前15分鐘內等體積混合，并避光放置。）

14. 每孔加入50μL終止液。終止后立即讀數。

15. 清除酶標l儀Blank(空白)孔值，讀取450nm處的光密度值，在570nm至590nm之間有修正。如果酶標l儀不能自動清除Blank(空白)孔值，那么手動扣除每個讀數的Blank(空白)孔光密度值。

武漢紐斯特生物科技有限公司（WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd），系美國生命科學試劑供應商美國NewEastBio在中國的子公司。公司位于武漢東湖高新技術開發(fā)區(qū)光谷生物城.美國NewEastBio專注于生命科學和生物技術領域，主要產品有小分子、ELISA試劑盒、蛋白等。

臨床測定技術的發(fā)展主要在于方法學的發(fā)展，而方法學的發(fā)展依托于試劑生產技術不斷進步更新和型標記物的應用。分子生物學正在并肯定會讓對整個生命科學有一個全l面而徹底的認識，其對免l疫測定技術發(fā)展的影響也是直接而又有效的，對以前一些難以檢測的生物活性物質的測定，并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。