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全自動核酸提取純化系統(tǒng)多重優(yōu)惠“本信息長期有效”

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發(fā)布時間:2020-09-08 19:04  






廣州勱博儀器有限公司產(chǎn)品服務(wù)包括:非洲病毒檢測、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測、非洲檢測、全自動核酸提取純化系統(tǒng)、病毒核酸提取系統(tǒng)、非洲病毒快速檢測試劑盒。我們的客戶對象是食品企業(yè)/公司/廠、食品加工企業(yè)/公司/廠、冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠、養(yǎng)殖場、養(yǎng)豬場、屠宰場、生豬屠宰場。但磁珠法由于磁珠吸附DNA分子的不均衡、且在后續(xù)洗脫過程中會造成核酸的斷裂和損失,因此在疑難檢材的檢驗過程中,存在PCR擴增失敗,DNA檢驗不成功的情況。

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如果檢測到熒光信號超過域值被認(rèn)為是真正的信號,它可用于定義樣本的域值循環(huán)數(shù)(Ct)。Ct值的含義是:每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號達到設(shè)定的域值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。研究表明,每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在線性關(guān)系,起始拷貝數(shù)越多,Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,因此只要獲得未知樣品的Ct值,即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計算出該樣品的起始拷貝數(shù)。溫度上的高分辨率使得運用定量PCR儀進行高分辨率熔解曲線(HRM)分析基因型成為可能。

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擴增序列特異性檢測方法是在PCR反應(yīng)中利用標(biāo)記熒光染料的基因特異寡核苷酸探針來檢測產(chǎn)物,它又可分為直接法和間接法。間接的方法就是利用水解探針的策略。目前在real-time Q-PCR中廣泛使用的TaqMan系統(tǒng)就是運用了這個原理。PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團,此時5′端熒光基團吸收能量后將能量轉(zhuǎn)移給臨近的3′端熒光淬滅基團(發(fā)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移,F(xiàn)RET),因此探針完整時,檢測不到該探針5′端熒光基團發(fā)出的熒光。(3)目前real-timeQ-PCR實驗成本比較高,從而也限制了其廣泛的應(yīng)用。


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根據(jù)動物防疫法及其配套規(guī)章規(guī)定,縣級動物衛(wèi)生監(jiān)督機構(gòu)依法向屠宰場派駐(出)官i方獸醫(yī)實施屠宰檢疫。按照生豬屠宰檢疫規(guī)程和相關(guān)規(guī)定,屠宰檢疫內(nèi)容包括傳i染病和寄i生蟲病,檢疫流程包括生豬進入屠宰廠(場、點)監(jiān)督查驗、檢疫申報、宰前檢查、同步檢疫、檢疫結(jié)果處理以及檢疫記錄等。在非洲防控期間,官i方獸醫(yī)監(jiān)督屠宰企業(yè)開展非洲自檢,對沒有開展自檢的屠宰企業(yè),對屠宰后的生豬產(chǎn)品一律不得出具動物檢疫證明。而且目前公認(rèn)ASFV對外界的抵抗力強,在自然條件下可以長時間保持感i染性,可以在血液、糞便和各種組織中長期保持感i染性。

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實時熒光定量PCR(real-time quantitativePCR)/QRT-PCR,是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光標(biāo)記物,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過擴增曲線對未知模板進行定量分析的方法。一般用于mRNA轉(zhuǎn)錄水平的定量研究、不同樣本或基因組中DNA拷貝數(shù)的測定、基因芯片結(jié)果驗證、藥i效分析等。金開瑞采用SYBR熒光染料法及TaqMan探針法進行熒光定量PCR檢測,從引物設(shè)計到檢測一次性完成,提供2種常用的內(nèi)參引物及免費的專業(yè)數(shù)據(jù)分析,每個樣品設(shè)置至少三個平行對照,保證結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。廣州勱博--博日病毒核酸提取系統(tǒng)在PCR擴增中,溶液中的模板變性后低溫退火時,引物與探針同時與模板結(jié)合。


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定量PCR已經(jīng)從基于凝膠的低通量分析發(fā)展到高通量的熒光分析技術(shù),即實時定量PCR。實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出,由于該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點。實時定量PCR (real-time quantitative PCR)是指在PCR指數(shù)擴增期間通過連續(xù)監(jiān)測熒光信號強弱的變化來即時測定特異性產(chǎn)物的量,并據(jù)此推斷目的基因的初始量,不需要取出PCR產(chǎn)物進行分離。從20世紀(jì)60和70年代i開始ASF由非洲蔓延至歐美地區(qū),2007年格魯吉亞、亞美尼亞、阿塞拜疆和俄羅斯都出現(xiàn)了大面積流行,2018年8月也開始在我國快速蔓延開來,對我國養(yǎng)豬業(yè)的持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展構(gòu)成巨大威脅。

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PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;廣州勱博--養(yǎng)殖場核酸提取純化在PCR反應(yīng)早期,產(chǎn)生熒光的水平不能與背景明顯地區(qū)別,而后熒光的產(chǎn)生進入指數(shù)期、線性期和最終的平臺期,因此可以在PCR反應(yīng)處于指數(shù)期的某一點上來檢測PCR產(chǎn)物的量,并且由此來推斷模板最i初的含量。PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步.


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