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在前PCR區(qū)建立PCR混合物:
⑴可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分裝并保存在-20℃或4℃,在實(shí)驗(yàn)室只涉及到擴(kuò)增一種或少數(shù)幾種特異序列時(shí)這樣做很有用。
⑵如果你的實(shí)驗(yàn)室使用多套引物,以致于配制包括所有試劑的單一反應(yīng)混合物不夠經(jīng)濟(jì),可以考慮分裝保存夠一天的PCR成分。
⑶作為一個(gè)規(guī)則,應(yīng)該保存一套陰性、弱陽性和強(qiáng)陽性對(duì)照樣品來分析樣品配制和PCR前過程的效率和潔凈程度。而且,你也希望通過使用一個(gè)已知的弱陽性樣品來驗(yàn)證你的樣品緩沖液以證明里面不含擴(kuò)增抑制物。
⑷陰性樣品要與每組樣品同時(shí)做,以分析是否存在樣品與樣品之間的污染以及是否存在PCR產(chǎn)物的污染,陰性對(duì)照應(yīng)該包括核酸以外的所有試劑。
⑸當(dāng)做陽性對(duì)照時(shí),有兩個(gè)理由決定了應(yīng)該使用很少數(shù)量的核酸。
⑹由于必須有對(duì)照反應(yīng),對(duì)照模板的特點(diǎn)應(yīng)該予以考慮。
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PCR實(shí)驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)及壓力控制
PCR實(shí)驗(yàn)室并沒有嚴(yán)格的凈化要求,但是為避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式。同時(shí),要嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求。
PCR試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)
該實(shí)驗(yàn)區(qū)主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū),不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。
對(duì)與氣流壓力的控制,本區(qū)并沒有嚴(yán)格的要求。
醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)工程
檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)是指對(duì)臨床標(biāo)本進(jìn)行正確地收集和測(cè)定,提供準(zhǔn)確和及時(shí)的報(bào)告,并能為臨床提供咨詢服務(wù),幫助臨床將這些數(shù)據(jù)正確地應(yīng)用于診斷和預(yù)防工作中去的一門學(xué)科。
它的基本任務(wù)是通過生物、微生物、抗原抭體、細(xì)胞或其它體液的檢驗(yàn),與其它檢查技術(shù)相配合以確定患者的臨床診斷。
在檢驗(yàn)學(xué)科(包括各學(xué)科實(shí)驗(yàn)室,或醫(yī)院中的科研實(shí)驗(yàn)室),隨著科學(xué)技術(shù)發(fā)展,生物化學(xué)、遺傳學(xué)、生物學(xué)、分析化學(xué)、生物物理學(xué)以及電子技術(shù)、計(jì)算機(jī)、儀器分析等學(xué)科和技術(shù)都向醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行廣泛的滲透。無論在基礎(chǔ)理論上或者應(yīng)用技術(shù)上"醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)"都有了極其深刻和廣泛的發(fā)展,所以從事檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)應(yīng)該有扎實(shí)的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)工作的理論基礎(chǔ)和高超的技術(shù)。
現(xiàn)代醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室已不僅僅是過去那種只限于使用顯微鏡的手工作坊式的工作模式了,除了廣泛應(yīng)用于自動(dòng)化技術(shù)的各種先進(jìn)儀器外,還用了激光、色譜分析、質(zhì)譜分析、熒光分析、流式細(xì)胞術(shù)、DNA擴(kuò)增技術(shù)等一系列的技術(shù)手段。
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一般來說,在pcr實(shí)驗(yàn)室凈化中,北方地區(qū)空氣中的粉塵含量較高,特別是新風(fēng)機(jī)的一次和中間過濾器應(yīng)及時(shí)檢查和更換,這不僅可以延長(zhǎng)系統(tǒng)末端過濾器的使用壽命,還可以避免風(fēng)量不足,使每次聚合酶鏈反應(yīng)凈化中難以保證正壓的建立。每月應(yīng)定期檢查初、中效過濾器有無損壞或堵塞,如有損壞或堵塞應(yīng)及時(shí)更換。
經(jīng)pcr實(shí)驗(yàn)室凈化的每臺(tái)空調(diào)機(jī)組的供、回氣管均配有防火閥,以確保其安全性和可靠性。應(yīng)由維護(hù)人員按照國(guó)家相關(guān)規(guī)定進(jìn)行檢查和測(cè)試。