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試劑準(zhǔn)備
1. 非乙?;痗AMP標(biāo)準(zhǔn)品
將5000 pmol/mL cAMP標(biāo)準(zhǔn)品溶液平衡至室溫。從#1至#6標(biāo)記六只潔凈試管。移取475μL 0.1M HCl到#1號(hào)試管,400μL到#2至#6號(hào)試管。加入25μL 5000 pmol/mL cAMP標(biāo)準(zhǔn)品到#1管中,劇烈渦旋震蕩。從#1管中取出100μL溶液至#2管中,渦旋震蕩。以此類(lèi)推,重復(fù)上步操作,梯度稀釋至#6管。
經(jīng)以上操作,#1至#6管中cAMP標(biāo)準(zhǔn)品濃度分別為250,50,10,2,0.4和0.08 pmol/mL(詳見(jiàn)cAMP實(shí)驗(yàn)稀釋詳情鍵盤(pán)紙)。稀釋過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)品需在30分鐘內(nèi)使用。
標(biāo)記一只試管作為無(wú)標(biāo)準(zhǔn)品空白對(duì)照(NSB)。移取600μL 0.1M HCl到NSB管中。
2. 洗滌液
將15 mL 10×洗滌液儲(chǔ)液加到135 mL去離子水中,稀釋成工作液。稀釋液可在室溫保存至試劑盒有效期限,或者3個(gè)月。
線性關(guān)系
cAMP濃度為16.0pmol/mL的樣品,用0.1M HCl進(jìn)行連續(xù)七次1:2梯度稀釋。將實(shí)際的cAMP濃度和測(cè)定的cAMP濃度繪制圖表。該直線的斜率為1.000,相關(guān)系數(shù)為0.999。
交叉反應(yīng)
部分相關(guān)化合物的交叉反應(yīng)由競(jìng)爭(zhēng)ELISA測(cè)定。將可能的交叉反應(yīng)物溶解到試劑盒分析緩沖液中,濃度從500pmol/mL至500,000pmol/mL。這些樣品通過(guò)乙?;赾AMP競(jìng)爭(zhēng)分析中被測(cè)定,通過(guò)比較樣品中交叉試劑的實(shí)際濃度,可以計(jì)算出交叉反應(yīng),并用百分比(%)表示。
武漢紐斯特生物科技有限公司(WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd),系美國(guó)生命科學(xué)試劑供應(yīng)商美國(guó)NewEastBio在中國(guó)的子公司。公司位于武漢東湖高新技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)光谷生物城.美國(guó)NewEastBio專注于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域,主要產(chǎn)品有小分子、ELISA試劑盒、蛋白等,與世界高校和研究所、世界大制藥公司、生物科技公司和醫(yī)院等客戶建立了長(zhǎng)期穩(wěn)定的合作關(guān)系,產(chǎn)品銷(xiāo)往全球。
樣品處理
紐斯特生物的ELISA試劑盒適用于檢測(cè)經(jīng)過(guò)鹽酸處理而終止內(nèi)源性磷酸二酯酶活性的cAMP樣品。這種樣品可直接應(yīng)用于檢測(cè),而不需要蒸發(fā)和進(jìn)一步的處理。
組織樣本需預(yù)先冰凍于液氮中。在不銹鋼研缽中用液氮將組子樣本研磨成精細(xì)粉末。待液氮揮發(fā)完后,稱量冰凍組織樣本并加入10倍體積的0.1M HCl混勻。室溫以大于600g離心力離心,取上層清夜用0.1M HCl稀釋至適當(dāng)濃度。