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該試劑盒的原理是基于夾心酶聯(lián)immune-sorbent測定技術(shù)。 捕獲抗體預(yù)包被到 96 孔板上。 并以生物素偶聯(lián)抗體作為檢測抗體。
隨后將標(biāo)準(zhǔn)品、測試樣品和生物素偶聯(lián)檢測抗體加入孔中,并且用洗滌緩沖液洗滌。 加入 HRP-鏈霉親和素,用洗滌緩沖液。 TMB 底物用于觀察 HRP 酶促反應(yīng)。 HRP 催化 TMB產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物,加入酸性終止液后變?yōu)辄S色。 黃色密度與板中捕獲的目標(biāo)樣品量成正比。 閱讀microplate reader O.D. 450nm 處的吸光度,然后可以計(jì)算目標(biāo)的濃度。
ELISA實(shí)驗(yàn)相比其他immunity測定方法的優(yōu)勢為:
1. 實(shí)驗(yàn)中使用微量滴定板可以同時(shí)檢測多種實(shí)驗(yàn)條件,并且可以快速地篩選出zui優(yōu)的實(shí)驗(yàn)條件。
2.可以重復(fù)測定,從而輕松地獲取定量數(shù)據(jù)。
3. 由于微量滴定板的孔容量很小,相應(yīng)的試劑需求量也較少。
4. 在ELISA測定過程中能夠保持蛋白質(zhì)的天然構(gòu)象和zui佳反應(yīng)條件,e2 elisa 試劑盒,讓檢測條件更接近于生理狀態(tài)。
如果您在結(jié)果中注意到“鉤狀效應(yīng)”,可能的原因是分析物不足以與樣品中抗原的量結(jié)合。這個(gè)問題也可以通過首先在一系列稀釋度下進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)測試來解決。如果您發(fā)現(xiàn)結(jié)果靈敏度較低,則需要檢查:
- 試劑盒保存是否正確
- 檢測試劑是否充分發(fā)揮作用
- 您的樣品類型和緩沖液是否兼容
- 靶蛋白和底物濃度/數(shù)量是否是足夠的
- 讀板器的吸附波長設(shè)置是否正確
- 記錄時(shí)間是否足夠長
- 您的ELISA試劑盒對您的測定是否具有正確的靈敏度。
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