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DNA限制性內(nèi)切酶酶切是一項(xiàng)基于DNA限制性內(nèi)切酶的基因工程技術(shù),其基本原理是利用限制性內(nèi)切酶對(duì)DNA上特定序列的識(shí)別,來確定切割位點(diǎn)并實(shí)現(xiàn)切割,從而獲得所需的特定序列。
生物體內(nèi)能識(shí)別并切割特異的雙鏈DNA序列的一種內(nèi)切核酸酶。它是可以將外來的DNA切斷的酶,即能夠限制異源DNA的侵入并使之失去活力,但對(duì)自己的DNA卻無損害作用,這樣可以保護(hù)細(xì)胞原有的遺傳信息。由于這種切割作用是在DNA分子內(nèi)部進(jìn)行的,故名限制性內(nèi)切酶(簡(jiǎn)稱限制酶)。
根據(jù)限制酶的結(jié)構(gòu),快切酶,輔因子的需求切位與作用方式,可將限制酶分為三種類型,分別是第yi型(Type I)、第二型(Type II)及第三型(Type III)。
第yi型限制酶同時(shí)具有修飾(modification)及認(rèn)知切割(restriction)的作用;另有認(rèn)知(recognize)DNA上特定堿基序列的能力,通常其切割位(cleavage site)距離認(rèn)知位(recognition)可達(dá)數(shù)千個(gè)堿基之遠(yuǎn)。例如:EcoB、EcoK。
第二型限制酶只具有認(rèn)知切割的作用,修飾作用由其他酵素進(jìn)行。所認(rèn)知的位置多為短的回文序列(palindrome sequence);所剪切的堿基序列通常即為所認(rèn)知的序列。是遺傳工程上,實(shí)用性較高的限制酶種類。例如:EcoRI、HindIII?! ?/p>
第三型限制酶與第yi型限制酶類似,同時(shí)具有修飾及認(rèn)知切割的作用??烧J(rèn)知短的不對(duì)稱序列,切割位與認(rèn)知序列約距24-26個(gè)堿基對(duì)。例如:EcoPI、HinfIII。
幾種酶的比較及限制酶
1幾種酶的比較
(1)限制性內(nèi)切酶:作用于DNA分子,切割磷酸二酯鍵,形成黏性末端或平末端。
(2) DNA連接酶:作用于DNA分子片段,連接磷酸二酯鍵,形成重組DNA分子。
(3) DNA聚合酶:作用于脫氧核苷酸,連接磷酸二酯鍵,形成新的DNA分子。
(4)解旋酶:作用于DNA分子,作用于氫鍵,形成DNA分子的單鏈。
2.限制酶:
(1)一種限制酶通常只識(shí)別一種特定的堿基序列,但是有少數(shù)限制酶卻可以識(shí)別不止
一種堿基序列。
(2)不同限制酶也可以識(shí)別同-堿基序列;
(3)不同限制酶識(shí)別的堿基序列雖然不同,但切出的末端也可能相互連接。
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