磷酸化酶的性質

糖基轉移酶類下的一個組群，即專司催化磷酸解作用的一類酶總稱。廣泛分布于動物(肝、肌)、植物、微生物中，包括糖原磷酸化酶(glycogenphosphorylase，EC2.4.1.1，分子量3.7×105)、麥芽糖磷酸化酶(EC2.4.1.8.)、1，3-β-D-低聚葡聚糖磷酸化酶(EC2.4.1.30.)、海帶二糖磷酸化酶(1aminaribiose phosphorylase EC 2.4.1.31.)、纖維糊精磷酸化酶(EC2.4.1.49.)、1，3-β-D-葡聚糖磷酸化酶(EC2.4.1.97.)、嘧1啶核苷磷酸化酶(EC2.4.2.2.)、尿苷磷酸化酶(EC2.4.2.3.)、胸腺嘧1啶磷酸化酶(EC2.4.2.4.)、鳥苷磷酸化酶(EC2.4.2.15.)等。例如很有代表性的磷酸化酶是糖原磷酸化酶，糖原在體內降解過程中，該酶是催化糖原還原性末端葡萄糖殘基的d-1，4-糖苷鍵斷裂，反應，生成1-磷酸葡萄糖和少了一個葡萄糖基的糖原分子(見圖)。這類酶多數是作為生化試劑應用于研究。

自身引導法 。合成的單鏈eDNA3’端能夠形成一短的發(fā)夾結構，這就為第二鏈的合成提供了現(xiàn)成的引物。當鏈合成反應產物的DNA—RNA雜交鏈變性后利用大腸DNA聚合酶I Klenow片段或反轉錄酶合成eDNA第二鏈，用對單鏈特異性的S1核酸酶消化該環(huán)，綠豆核酸酶，即可進一步。但自身引導合成法較難控制反應，而且用S1核酸酶切割發(fā)夾結構時無一例外地將導致對應于mRNA5’端序列出現(xiàn)缺失和重排，因而該方法很少使用。

長基因組序列、特別是包含大的基因簇的那些的克1隆對于產生medicine和生物燃料的合成生物學和基因工程工作特別重要。傳統(tǒng)的基于PCR的克1隆方法通常受限于DNA模板的長度和GC含量：標準的PCR反應常規(guī)產生至多10 kb的片段，而更長的PCR產物需要反應條件的繁瑣優(yōu)化，并且甚至在理想條件下，通常受限于35 kb5?；蛘撸赏ㄟ^裝配多個短片段，例如重疊PCR產物或化學合成的DNA寡聚物，產生長的目的基因組序列，但這樣的方法趨于耗時和昂貴，特別是對于獲得長于50 kb的序列(其通常需要3-5階段，每個包含多個裝配事件)6，7。獲得長的基因組序列的另一方法是通過基因組DNA的限制性酶消化。




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