營(yíng)養(yǎng)條件

1．培養(yǎng)基細(xì)胞培養(yǎng)基包含細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，包括碳水化合物、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、維生素等。針對(duì)不同細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)需求，有多種合成培養(yǎng)基可供選擇，如EBSS、Eagle、MEM、RPMll640、DMEM等。

2．其他添加成分在各種合成培養(yǎng)基提供基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)之外，還需根據(jù)不同細(xì)胞和不同的培養(yǎng)目的添加其他成分，如血1清、因子等。

血1清提供的是細(xì)胞外基質(zhì)、生長(zhǎng)因子和轉(zhuǎn)鐵蛋白等重要物質(zhì)，常用的是胎牛血1清。要根據(jù)不同的細(xì)胞和不同的研究目的決定添加血1清的比例。10%～20%的血1清能維持細(xì)胞較快的生長(zhǎng)增殖速度，稱為生長(zhǎng)培養(yǎng)液；為維持細(xì)胞緩慢生長(zhǎng)或不死，添加2%～5%的血1清即可，稱為維持培養(yǎng)液。但血1清中也存在有害于細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的物質(zhì)，如補(bǔ)體、免1疫球蛋白和一些生長(zhǎng)抑制因子；成分不明確，影響對(duì)結(jié)果的分析；不同動(dòng)物、不同批次的血1清活性差別較大，影響培養(yǎng)效果的穩(wěn)定性。

谷氨酰胺是細(xì)胞生長(zhǎng)重要的氮源，在細(xì)胞生長(zhǎng)代謝過(guò)程中起重要作用，但由于谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定容易降解，4℃下放置7天即可分解約50%，細(xì)胞培養(yǎng)，故谷氨酰胺需在使用前添加。

利用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)研究細(xì)胞的生命活動(dòng)規(guī)律，可以很方便地采用各種實(shí)驗(yàn)技術(shù)和方法來(lái)觀察、檢測(cè)和記錄。例如：通過(guò)倒置相差顯微鏡等直接觀察活的細(xì)胞；應(yīng)用縮時(shí)電影技術(shù)、攝像或者通過(guò)閉路電視長(zhǎng)時(shí)間連續(xù)記錄和觀察被培養(yǎng)細(xì)胞的體外生長(zhǎng)情況，可以直觀揭示培養(yǎng)細(xì)胞的生命活動(dòng)規(guī)律以及所施加因素的反應(yīng)；利用同位素標(biāo)記、放1射免1疫等方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)合成和代謝變化等。

傳統(tǒng)檢測(cè)細(xì)胞增殖的方法就像照相機(jī)，只能拍攝一個(gè)瞬間，即檢測(cè)某個(gè)時(shí)間點(diǎn)的細(xì)胞增殖，并且無(wú)法對(duì)各類細(xì)胞的增殖做區(qū)分。肝細(xì)胞增殖速率較為緩慢，而肝1臟中其他類型的細(xì)胞比如巨噬細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生增殖的速率又相對(duì)較快。利用傳統(tǒng)方法檢測(cè)細(xì)胞增殖，在某一時(shí)間點(diǎn)內(nèi)能夠獲取的肝細(xì)胞增殖信號(hào)非常微少甚至沒(méi)有，即便有也很容易被其他細(xì)胞的增殖信息淹沒(méi)。

研究組開(kāi)發(fā)了一種能夠捕1捉細(xì)胞增殖的錄像機(jī)——ProTracer，既可以在長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)不間斷地追1蹤細(xì)胞增殖，又可以定位，追1蹤某一特定細(xì)胞類群（如肝細(xì)胞）的細(xì)胞增殖，讓黑夜中只有被鎖定目標(biāo)的“星群”可以發(fā)光，而不是在滿天繁星中找尋其中的一兩顆。

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