DNA部分片段的連接

　　DNA部分片段通過用每一種限制性內(nèi)切酶過量消化底物DNA而獲得。這些片段隨后用T4 DNA連接酶連接( 5′末端濃度為0.1-1.0 μM)。連接的片段然后用同一種限制性內(nèi)切酶重切。僅當(dāng)3′和 5′末端都保留完整，連接反應(yīng)才會(huì)發(fā)生;而且只有那些識(shí)別位點(diǎn)完全恢復(fù)的分子才能被重切。切割后正常的帶型說明3′和 5′末端都是完整的，而且準(zhǔn)備的酶樣品中檢測不到核酸外切酶和磷酸酶。

限制性內(nèi)切酶的質(zhì)量控制鑒定

限制性內(nèi)切酶的一個(gè)活性單位是指，mRNA切割酶，在50μl 的反應(yīng)體系里，采用隨酶提供的 NEBuffer，用1個(gè)小時(shí)的時(shí)間，消化1μg底物DNA所需要的酶量。酶切反應(yīng)應(yīng)在帶蓋的eppendorf 管中進(jìn)行，選用技術(shù)數(shù)據(jù)卡上所標(biāo)明的適宜溫度。在確定酶活性之前，濃縮的酶應(yīng)該用推薦的貯存液稀釋成大約1，000 單位/ml。

質(zhì)量控制

所有質(zhì)量控制鑒定結(jié)果都公布在隨酶提供的技術(shù)數(shù)據(jù)卡上。

一般是以微生物屬名的第yi個(gè)字母和種名的前兩個(gè)字母組成，第四個(gè)字母表示菌株（品系）。例如，從Bacillus amylolique faciens H中提取的限制性內(nèi)切酶稱為Bam H，在同一品系細(xì)菌中得到的識(shí)別不同堿基順序的幾種不同特異性的酶，可以編成不同的號(hào)，如HindⅡ、HindⅢ，HpaI、HpaⅡ，MboI、MboⅡ等。

別名：restriction endonuclease簡稱限制酶

酶反應(yīng)：限制性內(nèi)切酶能分裂DNA分子在一限定數(shù)目的專一部位上。它能識(shí)別外源DNA并將其降解。

單位定義：在指明pH與37℃，在0.05mL反應(yīng)混合物中，1小時(shí)消化1μg的λDNA的酶量為1單位。

性狀制品不含非專一的核酸水解酶（由10單位內(nèi)切酶與1μg λDNA，保溫16小時(shí)所得的凝膠電泳圖譜的穩(wěn)定性表示），這類酶主要是從原核生物中分離出來的，迄今已經(jīng)從近300多種不同的微生物中分離出約4000種限制酶。

mRNA切割酶-友名生物公司由武漢友名生物技術(shù)有限公司提供。武漢友名生物技術(shù)有限公司實(shí)力不俗，信譽(yù)可靠，在湖北 武漢 的其它等行業(yè)積累了大批忠誠的客戶。友名生物帶著精益求精的工作態(tài)度和不斷的完善創(chuàng)新理念和您攜手步入輝煌，共創(chuàng)美好未來！