PCR技術的基本原理

PCR技術是在模板DNA、引物和四種dNTP等存在的條件下.依賴于DNA聚合酶(T aq酶)的酶.促合成反應。其具體反應分三步:變性、退火、聚合。以上三步為一個循環(huán)，每一 循環(huán)的產(chǎn)物DNA又可以作為下一個循環(huán)模板，數(shù)小時后，介于兩個引物之間的目的DNA得到了大量的copy，經(jīng)25~ 30次循環(huán)DNA數(shù)量可達2x1067拷貝數(shù)。

錨定PCR(Anchored PCR. APCR技術.

用酶法在一通用引物反轉(zhuǎn)錄cDNA3"-末端加上一段已知序列，然后以此序列為引物結合位點對該cDNA進行擴增，稱為APCR.應用:它可用于擴增未知或全知序列，如未知cDNA的制備及低豐度cDNA文庫的構建。

原位PCR( in situ PCR)技術

原位PCR綜合了PCR和原位雜交( Insitu hybridization， ISH)的優(yōu)點是一種在組織切片或細胞涂片上原位對特定的DNA或RNA進行擴增.再用特異性的探針原位雜交檢測。原位PCR標本一般需先經(jīng)化學固定，以保持組織細胞的良好形態(tài)結構。細胞膜和核膜有一定的通透性，PCR擴增所需的各種成分可進入細胞內(nèi)或核內(nèi)。在原位對特定的DNA或RNA進行擴增。擴增產(chǎn)物由于分子量較大或互相交織，不易透過細胞膜向外彌散，故保留在原位。這樣就很容易應用ISH將其檢出，同時還可對目的DNA序列的組織細胞進行形態(tài)學分析。

梯度PCR儀

把一次性PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件（溫度梯度），通常12鐘溫度梯度，這樣的儀器就叫梯度PCR儀。

工作模式和原理同普通PCR儀一樣，它出了又普通PCR儀的功能外還多了一個梯度退火功能。DNA部分片段的擴增對溫度的控制精度要求特別高，不同的DNA部分片段其退火溫度不一樣，通過計算DNA部分片段中的CG堿基的含量只能初步的判斷出zui優(yōu)退火溫度在 5℃范圍內(nèi)，如果用普通PCR儀進行研究，需重復擴增很多次，然后做電泳進行分析來確定zui優(yōu)退火溫度。而梯度PCR儀則只需要一次就可以完成，在節(jié)省了時間的同時提高了實驗的可靠性和準確性。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴增，這樣節(jié)約成本的同時也節(jié)約了時間和經(jīng)費。在不設置梯度的情況下，梯度PCR儀也可以做普通PCR擴增。

該儀器主要應用于科研，一步法RT-PCR試劑盒，教學機構，醫(yī)學臨床研究，高等院校，病毒分析，疾控中心等。

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