PCR出現(xiàn)假陰性

不出現(xiàn)擴增條帶。PCR反應的關鍵環(huán)節(jié)有①模板核酸的制備，②引物的質量與特異性，③酶的質量及Br乙錠的使用， ④PCR循環(huán)條件。尋找原因亦應針對上述環(huán)節(jié)進行分析研究。

模板：①模板中含有雜蛋白質，②模板中含有Taq酶抑制1劑，③模板中蛋白質沒有消化除凈，特別是染色體中的組蛋白，④在提取制備模板時丟失過多，或吸入酚。⑤模板核酸變性不。在酶和引物質量好時，不出現(xiàn)擴增帶，極有可能是標本的消化處理，模板核酸提取過程出了毛病，因而要配制有效而穩(wěn)定的消化處理液，其程序亦應 固定不宜隨意更改。

等位基因特異性PCR(Allele- specificPCR. ASPCR技術

ASPCR依賴于引物3”-端的一個堿基錯配，Taq酶，不僅減少多聚酶的延伸效率，而且降低引物-模板復合物的熱穩(wěn)定性。這樣有點突變的模板進行PCR擴增后檢測不到擴增產物.可用于檢測基因點突變。

單鏈構型多態(tài)性PCR(single- strandconformational polymorphism PCR， SSCPPCR)技術

SSCP- PCR是根據(jù)形成不同構象的等長DNA單鏈在中性聚丙1烯酰胺凝膠中的電泳遷移率變化來檢測基因變異。在不含變性劑的中性聚丙1烯酰胺凝膠中，單鏈DNA遷移率除與DNA長度有關外，更主要取決于DNA單鏈所形成的空間構象。相同長度的單鏈DNA因其順序不同或單個堿基差異所形成的構象就會不同，PCR產物經變性后進行單鏈DNA凝膠電泳時，每條單鏈處于一定的位置.靶DNA中若發(fā)生堿基缺失、插入或單個堿基置換時.就會出現(xiàn)泳動變位。從而提示該片段有基因變異存在。

隨機引物擴增技術(arbitrary primedPCR， AP- PCR)

AP-PCR技術通過隨意設計或選擇一個非特異性引物.在PCR反應體系中.首先在不嚴格條件下使引物與模板中許多序列通過錯配而復性。如果在兩條單鏈上相距一定距離有反向復性引物存在，則可經Taq酶的作用使引物延伸而發(fā)生DNA部分片段的擴增。經一至數(shù)輪不嚴格條件下的PCR循環(huán)后，再于嚴格條件下進行擴增。擴增的產物經DNA測序凝膠電泳分離后.經放1射性自顯影或熒光顯示即可得到DNA指紋圖。AP-PCR用于腫1瘤的抑制基因、癌基因的分離;菌1種、菌株及不同物種的鑒定;遺傳作圖;不同分化程度或某些不同狀態(tài)下的組織的基因表達差異等方面的研究。

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