細(xì)胞凍存的操作步驟

1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血的凍存培養(yǎng)液；

2. 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。

3. 去除PBS，CS250凍存袋報(bào)價(jià)，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化下來(lái)；

4. 離心1000rpm，5min；

5. 去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的密度為5×106/ml～1×107/ml；

6. 將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；

7. 在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱，凍存時(shí)間及操作者；

8. 凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1～-2℃/ min；當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí)，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時(shí)，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，CS50凍存袋報(bào)價(jià)，然后放入-70℃冰箱中過(guò)夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。

凍存袋的作用

適度地保存一定量的細(xì)胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種，起到了細(xì)胞保種的作用。除此之外，還可以利用細(xì)胞凍存的形式來(lái)購(gòu)買、寄贈(zèng)、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞。 細(xì)胞凍存時(shí)向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5%．15%的甘油或二亞砜(DMSO)，可使溶液冰點(diǎn)降低，加之在緩慢凍結(jié)條件下，細(xì)胞內(nèi)水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細(xì)胞損傷。

動(dòng)物細(xì)胞凍存組織

1. 首先準(zhǔn)備好用于包裝樣本的鋁箔或冷凍保存管，并且用油性記號(hào)筆在鋁箔或凍存管外表多處寫明樣本編號(hào)。

2. 準(zhǔn)確切除所需組織后，凍存袋報(bào)價(jià)，立即剔除結(jié)締組織和脂肪組織等非研究所需的組織類型。

3. 在RNase-free 的生理鹽水中迅速漂洗樣本，以去除血漬和污物。

4. 用準(zhǔn)備好的鋁箔或冷凍保存管裝載包裹組織，迅速投入液氮冷卻。

5. 填寫樣本登記單，寫明樣本名稱、組織類型、編號(hào)、取樣日期、樣本處理過(guò)程等情況。

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