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凍存袋實驗前的準(zhǔn)備
生長良好之培養(yǎng)細(xì)胞、新鮮培養(yǎng)基、DMSO、無菌塑料冷凍保存管(Nalgene 5000-0020)、等速降溫機
冷凍方法理論準(zhǔn)備:
(1)傳統(tǒng)方法:冷存管置于4℃10分鐘--->-20℃30分鐘--->-8O℃16~18小時(或隔夜)--->液氮槽長期儲存。-20℃不可超過1小時,以防止胞內(nèi)冰晶過大,CS250凍存袋哪家好,造成細(xì)胞大量消失,亦可跳過此步驟直接放入-8O℃冰箱中。
(2)程序降溫:利用已設(shè)定程序的等速降溫機以-1~-3℃/分鐘之速度由室溫降至(-8o℃以下) -120℃,CS250凍存袋代理,再放在液氮槽長期儲存。適用于懸浮型細(xì)胞與hybridoma之保存。
凍存袋操作流程
(1)冰凍當(dāng)天進入醫(yī)院局域網(wǎng),查詢當(dāng)日手術(shù)間冰凍安排表,大致了解當(dāng)日的冰凍情況,并提前通知當(dāng)日負(fù)責(zé)冰凍送片的初檢醫(yī)生,避免遺漏。
(2)取材前確定標(biāo)本冰凍報告已發(fā)出,核對標(biāo)本病理號、住院號,準(zhǔn)確記錄其病理號、住院號、姓名(至少有其中2項)于凍存組織登記本上。
(3)在新鮮標(biāo)本取材臺上取材,并使用取材器具,CS250凍存袋,同一天使用頻繁時,每取完一例標(biāo)本器具應(yīng)清洗后浸泡于消毒液中,以防止其他標(biāo)本污染。
(4)在不影響外檢取材的前提下,充分取材。良變?nèi)∽銐蛄坎≡睿∽內(nèi)∽銐蛄坎≡罴鞍┡哉=M織(癌旁正常組織遠(yuǎn)離病灶應(yīng)盡量>2cm)。
(5)將所取標(biāo)本切割成直徑1~2mm的組織塊,不同標(biāo)本及同一標(biāo)本不同部位裝入相應(yīng)凍存管中,做好標(biāo)記(注意順序,切取標(biāo)本、夾放凍存管都應(yīng)遵循“先正常-后”的順序,CS250凍存袋價格,避免組織污染)。
凍存袋的原理
細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,實驗證明這樣可以較大限度的保存細(xì)胞活力。如今細(xì)胞凍存多采用甘油或DMSO作保護劑,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷。
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