凍存袋注意事項(xiàng)

可用于細(xì)胞在-196℃液氮中的存儲(chǔ)和轉(zhuǎn)運(yùn)。所有凍存袋都是無菌即用型包裝。凍存袋對(duì)于大量細(xì)胞的凍存非常方便，但使用過程中還有些小地方需要注意。較大凍存體積的推薦是參照凍存袋平放，液體厚度8mm時(shí)液體的體積。增加凍存液體的量，凍存袋到是能裝下，但細(xì)胞復(fù)蘇的時(shí)候就麻煩了，凍存袋哪家好，液體厚度太大，融化所需時(shí)間太長，細(xì)胞活率要受很大的影響??！

細(xì)胞凍存袋方法

1、消化細(xì)胞（同實(shí)驗(yàn)二），將細(xì)胞懸液收集至離心管中。

2、1000rpm離心10分鐘，棄上清液。

3、沉淀加含保護(hù)液的培養(yǎng)，計(jì)數(shù)，調(diào)整至5×106/ml左右。

4、將懸液分至凍存管中，每管1 ml。

5、將凍存管口封嚴(yán)。如用安瓿瓶則火焰封口，封口一定要嚴(yán)，凍存袋代理，否則復(fù)蘇時(shí)易出現(xiàn)爆裂。

6、貼上標(biāo)簽，寫明細(xì)胞種類，凍存日期。凍存管外拴一金屬重物和一細(xì)繩。

7、按下列順序降溫：室溫→4℃（20分鐘)→冰箱冷凍室（30分鐘）→低溫冰箱(－30℃ 1小時(shí)）→氣態(tài)氮（30分鐘）→液氮。

注意：操作時(shí)應(yīng)小心，以免液氮。液氮定期檢查，隨時(shí)補(bǔ)充，不能揮發(fā)干凈，一般30立升的液氮能用1～1.5月。

細(xì)胞復(fù)蘇凍存袋

1. 從液氮容器中取出凍存管，朝陽區(qū)凍存袋，直接浸入37℃溫水中，CS250凍存袋批發(fā)，并不時(shí)搖動(dòng)令其盡快融化。

2. 從37℃水浴中取出凍存管，打開蓋子，用吸管吸出細(xì)胞懸液，加到離心管并滴加10倍以上培養(yǎng)液，混勻；

3. 離心， 1000rpm，5min；

4. 棄去上清液，加入含10%小牛血培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度，接種培養(yǎng)瓶，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；

5. 次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。

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