原位雜交 (ISH) 是用于定位固定組織和細胞中特定核酸靶標的強大技術,能夠獲得與基因表達和遺傳位點相關的時間和空間信息。 雖然ISH的基本工作流程與印跡雜交近似,即核酸探針被合成、標記、純化和特異性靶標退火,但其不同之處在于前者可通過可視化顯示組織內(nèi)的結(jié)果來獲得更多信息。 如今有兩種基本方法來實現(xiàn)可視化顯示原位RNA和DNA靶標,即熒光 (FISH) 和顯色 (CISH) 檢測。 每種檢測方法本身的特點(見下表)使得FISH和CISH適用于截然不同的應用。 雖然兩種方法均使用標記的、與樣本雜交的靶標特異性探針,ISH,但每種方法用于可視化顯示樣本的儀器不同。 這里我們將強調(diào)每種方法的不同之處和各自的優(yōu)勢。

武漢思特進科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實驗技術研發(fā)、實驗產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實驗項目承接為一體的高新技術公司;公司實驗中心有分子生物學平臺、細胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺;可以開展各類動、植物、細菌、細胞等生物實驗。
在選擇探針類型的同時,還需要選擇標記方法。探針的標記方法很多,選擇什么標記方法主要視個人的習慣和可利用條件而定。但在選擇標記方法時,還應考慮實驗的要求,如靈敏度和顯示方法等。一般認為放0射性探針比非放0射性探針的靈敏度高。放0射性探針的實際靈敏度不依賴于所采用的標記方法,如隨機引物延伸法往往得到比缺口平移法更高的比活性 。在檢測單拷貝基因序列時,應選用標記效0率0高、顯示靈敏的探針標記方法。在對靈敏要求不高時,可采用保存時間長的生物素探針技術和比較穩(wěn)定的堿性磷酸酶顯示系統(tǒng)。

熒光原位雜交(Fluorescence in situ hybridization, FISH)是一種分子細胞遺傳學技術,是20世紀80年代末期發(fā)展起來的一種非放6射性原位雜交技術。目前這項技術已經(jīng)廣泛應用于動植物基因組結(jié)構(gòu)研究、染色體結(jié)構(gòu)變異分析、病毒感5染分析、人類產(chǎn)前診斷、腫5瘤遺傳學和基因組進化研究等許多領域。FISH的基本原理是用熒光標記的單鏈核酸為探針,與待檢材料中未知的單鏈核酸進行特異性結(jié)合,形成可被檢測的雜交雙鏈核酸。可用熒光標記的探針直接與染色體進行雜交從而對基因進行染色體定位。
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