武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺、細(xì)胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達(dá)平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺;可以開展各類動、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。
亞細(xì)胞定位是指某種蛋白或表達(dá)產(chǎn)物在細(xì)胞內(nèi)的具體存在部位。例如在核內(nèi)、胞質(zhì)內(nèi)或者細(xì)胞膜上存在。GFP是綠色熒光蛋白,在掃描共聚焦顯微鏡的激光照射下會發(fā)出綠色熒光,從而可以地定位蛋白質(zhì)的位置。
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由稻瘟菌(Magnaporthe grisea)引起的稻瘟病是重要的水稻病害之一。以研究稻瘟菌致病基因?yàn)橹行?,探討致病相關(guān)基因的種類及其功能,生理小種和致病基因的關(guān)系,致病基因的遺傳分離和在群體中的轉(zhuǎn)移規(guī)律等等,能夠?yàn)樗究刮列匝芯亢偷疚敛』瘜W(xué)防治、生物防治提供理論基礎(chǔ)。 本研究利用在實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)建成的根癌農(nóng)介導(dǎo)的稻瘟菌T-DNA插入突變體庫,挑選了7個(gè)致病力缺陷的突變體,提取基因組DNA,PCR檢測確認(rèn)T-DNA的插入。利用DW-ACP-PCR(DNA Walking-Annealing Control Primer-PCR)技術(shù)對T-DNA右邊界側(cè)翼序列進(jìn)行擴(kuò)增,7個(gè)突變體都獲得了特異條帶。對這些特異條帶進(jìn)行并測序,其中5個(gè)測序成功,另外2個(gè)測序失敗。將成功的序列與稻瘟菌基因組和NCBI數(shù)據(jù)庫比對,發(fā)現(xiàn)1個(gè)為載體pCAMBIA1300序列,4個(gè)與稻瘟菌的基因組相似性達(dá)93%~99%,認(rèn)為是T-DNA插入位點(diǎn)的側(cè)翼序列。
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以擬南芥金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)體基因AtZIP1(GenBank登錄號:AAC24197)的氨基酸序列為信息探針,從水稻(Oryza sativa L.)中分離得到OsZIP7a和OsZIP8兩個(gè)鋅鐵轉(zhuǎn)運(yùn)體基因,OsZIP7a和OsZIP8分別編碼384和390個(gè)氨基酸殘基的產(chǎn)物。OsZIP7a和OsZIP8與ZIP家族成員有著高度的同源性,均包含8個(gè)跨膜區(qū),有著高度保守的ZIP結(jié)構(gòu),在第3和第4跨膜區(qū)之間存在一個(gè)可變區(qū),可變區(qū)富含組氨酸。半定量RT-PCR分析結(jié)果表明,OsZIP7a和OsZIP8在水稻根、莖、葉和幼穗等組織中均呈低水平表達(dá);在缺鐵處理時(shí),OsZIP7a基因在水稻幼苗根部的表達(dá)量增多,而在地上部的表達(dá)未明顯增多;在缺鋅處理的水稻幼苗中,洋蔥亞細(xì)胞定位怎么做,OsZIP8基因的表達(dá)量顯著增多。構(gòu)建OsZIP7a::GFP瞬時(shí)表達(dá)載體,采用農(nóng)介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化洋蔥表皮細(xì)胞,結(jié)果表明,OsZIP7a::GFP定位于洋蔥表皮細(xì)胞的質(zhì)膜上。構(gòu)建酵母表達(dá)載體pFL61-OsZIP7a和pFL61-OsZIP8,利用醋酸鋰方法分別轉(zhuǎn)入酵母雙突變株fet3fet4DEY1453和zrt1zrt2ZHY3中,設(shè)pFL61空載體為陰性對照,分別在低鐵和低鋅的酵母YPD培養(yǎng)基中進(jìn)行酵母功能互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)。
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